果蝇唾液腺染色体标本的制备和观察.docxVIP

实验2 果蝇唾液腺染色体标本的制备和观察2012012415生23李天奇实验目的掌握制片方法，了解果蝇唾液腺形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫技术实验原理唾液腺染色体是一类广泛存在于双翅目昆虫幼虫唾液腺内的巨大染色体。由于其染色体DNA经过多次复制，但并未发生细胞核分裂，同时唾液腺细胞中的染色体总是处于配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色线聚集在一起，并被称为多线染色体。实验用具及材料解剖镜、显微镜、解剖针、果蝇三龄幼虫实验方法及步骤结果与讨论在用解剖针扯去果蝇幼虫的头部后，可以清晰地看到一个透明茄型并附有乳白色条带的囊状体出现。经过小心的剥离脂肪体和其他杂物后，显微摄像图附于最后。首先由于其形状和分布可以确定这是一个唾液腺多线染色体，整个多线染色体的位置居中且亮度、对比度合适，染色适中，可以清晰看到每一条染色体和其上面的横纹。在这幅图中染色体分得比较开，可以清晰地分别出各条染色体和图片左下方的深染中心。但是美中不足的是由于压片时候的力量过大（压片50次），可以看到有部分染色体被压断，在深染中心左上的染色体条带的末端较深且粗壮，我判断应该是深染中心上的一臂。位于中心的多线染色体左侧的小段染色体由于在中心的多线染色体的线头处没有发现非常粗糙的短线处，因此判断其应该为非本染色体组的其他染色体的断片。位于中心部位的染色体末端短线处较为粗糙并染色较深，我判断其应该是深染中心处的另一个断臂，这样就找到了深染中心的全部的四个臂。位于图片上方的小断臂和其右方的长臂由于断处的距离和粗糙程度我判断为第一条X染色体形成的长条。就此，所有的染色体的条数就应该全部数清。思考与感悟 什么是染色中心：染色中心是果蝇唾液腺染色体染色后呈现较深色的区域，其成因是第二和第三对染色体以各自的着丝粒部位相聚集，形成一个一中心四臂的结构，其中心由于有较高的染色体密度（在单位体积上有很多的条带）因而会在染色时呈现出较深的染色中心。 剖取唾液腺时的注意事项：在果蝇头部（有黑点处）用解剖针按住并扯下，因为果蝇身体中有肠管等形状相似的结构可能造成混淆，因此首先挤压果蝇的头部，观察是否出现唾液腺，如果没有，再在果蝇的身体的近头部小心地用解剖针挤压来得到唾液腺染色体。在下结论时，要特别注意该结构需要同时满足三个条件：透明，茄型，有乳白色脂肪体位于其一侧。取出后由于唾液腺肉眼可见，因此可以直接在实验台面上利用吸水纸快速地把其他杂物剥离载玻片。对于这一操作，直接在肉眼下要比在解剖镜下更为容易做到快速除去杂物，从而降低了吸水纸将唾液腺吸走的风险。 照相和选取时的注意事项：首先需要选取一个好的多线染色体组，好的标准是：一个，无其他多线染色体干扰和重叠；染色体组完整，断裂较少并可以通过线头断裂后的性状进行重新拼接；染色体之间分开程度较大；无气泡或其他杂物干扰。作者选择的染色体组虽然分开程度较好，但是存在一定的由于压片力量过大而造成的染色体被压断的情况。在照相的时候，可以选择油镜。油镜的亮度和分辨率都要优于正常情况，但是油镜存在着景深较小，如果压片的时候样品不是很均匀的分开，很容易出现不能将染色体组的每个部分都完成对焦的情况。在照相时，需要将所准备照相的物体移至视野中央，调整焦距使得整个染色体组对焦准确，成像清晰。之后调整光强使得整个视野清晰明亮，对比度较高也可以有效降低背景中的气泡或杂物对染色体组观察的影响。