示差脉冲伏安法研究纳米物质对乳酸脱氢酶LDH酶活性的影响.pdfVIP

2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 示差脉冲伏安法研究纳米物质对乳酸脱氢酶 (LDH)酶活性的影响 姚开安’，王娜2，程炯佳2，杨正标2，倪海燕2，孙成1，毕树平’2 (I．南京大学污染控制与资源化国家重点实验室，南京210093： 2．南京大学化学化工学院，生命分析化学教育部重点实验室，南京210093) 纳米物质对环境和人体的潜在危害近年来得到了日益重视11，舶。酶是一种重要的分子生物标 志物，但在关于纳米物质的生物毒性研究中较少涉及到其对酶活性的影响。本文选用了乳酸脱氢 酶(LDH)作为研究对象(在辅酶NADH存在下，可逆的催化丙酮酸盐和乳酸盐间的转化反应： 对LDH酶活性的影响。 1试验部分 1．1试剂与仪器 兰教授课题组提供(直径小于10 在25．30n玎l问，球形)。实验均在N2气氛保护、恒温(25-{-1℃)条件下进行。 1．1．2仪器三电极系统：悬汞电极为工作电极，铂片电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极。 ms。 mV／s，脉冲幅度50mV，脉冲宽度50 2．2实验方法 O．1mol／L 2．2．1不同浓度的纳米物质对乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响在25mL pH=7．6 riffs．HCI缓冲溶液中加入纳米物质，超声10min后置于三电极系统，注射稀释100倍的酶溶液 30“1，搅拌反应5min。然后加入丙酮酸(O．8mmol／L)、NADH(0．2mmol／L)，每隔一定的时间 记录NAD+示差脉冲伏安还原峰电流fD。在最初反应的3min内，fp随反应时间的延长而线性增 加，因此可以求得反应的初速率。 2．2．2米氏常数及反应最大速率的测定实验主要步骤如1．2．1，加入固定量的丙酮酸(0．8 1．． K。 +—L作图，由图求得LDH催化体系的动力学参数‰和v。。。 一=：_·————二二·-—一 V Vm_xxCⅣ』D，， Vma。 2结果与讨论 对LDH酶活性均有抑制作用，并且抑制程度随纳米浓度增加而增大。三种纳米物质对酶的抑制 +通讯联系人 124 2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 非 d ／ 柏 拈 轴 为 一一((1：芒；g喜． ^一．I．EE一，Io§一， 筇 峙 多 一二 2 ■ 6 B C一(x’O‘tool／L) C1“柙ol，L)‘’) Fig．1三种纳米物质对乳酸脱氢酶酶促体系的影响 A：Theeffectof ontheLDH 0×10—4mol／L