细胞生物学-陈威16 第十六章 程序性细胞死亡与细胞衰老.pdfVIP

1第十六章细胞死亡与细胞衰老 内容： 第一节 细胞死亡 第二节 细胞衰老 2 细胞增殖和细胞死亡对生物体具有同样重要的意义 Homeostasis 稳态 Mitosis Apoptosis 3 第一节 细胞死亡 程序性细胞死亡（programmed cell death, PCD）:细胞内遗传机制控制的细胞死亡。 ? 细胞死亡的方式按照形 态学来分： 1. 细胞凋亡（apoptosis） 2. 坏死 （necrosis） 3. 自噬性细胞死亡（autophagic cell death） 4 一、细胞凋亡 ? 细胞凋亡是受基因控制的主动的细胞生理性自杀行为 ? 1972 年，澳大利亚病理学家Kerr 提出细胞凋亡 （apoptosis） ? apoptosis （apo-ptosis）源自古希腊语，意指花瓣或树叶 的脱落、 凋零。这一命名的生物学意义在于强调这种细 胞死亡方式是正常的生理过程 ? 1986年，Robert Horvitz发现线虫发育过程中控制细胞凋 亡的基因，使得细胞凋亡在基因水平上得到解释。 5 （一）细胞凋亡的特征 形态学上分3阶段： 1. 凋亡的起始 细胞表面特化结构消失；细胞间接触消失；细胞膜完整，也有选择通 透性；线粒体完整；核糖体与内质网脱离；内质网膨胀，与质膜融合； 染色质固缩，沿核膜分布。 2. 凋亡小体的形成 染色质断裂，与细胞器聚集在一起被细胞质膜包裹形成球形凋亡小体 3. 吞噬 凋亡小体被邻近细胞或吞噬细胞吞噬，在溶酶体内被消化分解。 6 （二）细胞凋亡的检测方法 7 1. 形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察 台盼蓝（trypan blue）-死细胞着色 DAPI， Giemsa染色 ? Sculpting the digits in the developing mouse paw by apoptosis（Wood 2000） 82. DNA电泳 细胞色素 c 诱导的凋亡细胞 DNA电泳图 细胞色素c诱导的凋亡细 胞DNA电泳图 1．细胞色素c诱导0 h 2．细胞色素c诱导1 h 3．细胞色素c诱导2 h 4．细胞色素c诱导3 h 5．细胞色素c诱导4 h 6．阴性对照 7．Marker （二）细胞凋亡的检测方法 3. DNA 断裂的原位末端标记法 ? 转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法（TUNEL） ? 脱氧核糖核苷酸末端转移酶 ? 能对DNA 分子 断裂缺口中的3′-OH 进行原位标记 ? 凋亡细胞的核DNA 断裂后产 生3′-OH 末端，因此可借助一种可观测 的标记物如荧 光素对单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色 原位末端标记法显示斑马鱼胚胎发育过程中的细胞凋亡 9 10 4. 彗星电泳法（comet assay） 彗星图像(× 400)A .死后0 h;B .死后3 h;C .死后15 h 大鼠死后脾细胞核DNA 降解 11 4. 彗星电泳法（comet assay） 12 5. 流式细胞仪 （二）细胞凋亡的检测方法 6. 检测细胞膜成分变化 ? 检测磷脂酰丝氨酸的外翻 Annexin V磷脂结合蛋白 其他方法： ? 检测caspases 的激活 ? 检测Cyt c 的释放 ? 检测线粒体膜电位的变化等 “eat me” signal is the presence ofphosphatidylserine molecules in the outer leaflet of PM of apoptotic cells. 13 细胞凋亡早期，位于细胞 膜内侧的磷脂酰丝氨酸 （PS）迅速翻转到细胞膜 外侧，使得PS 暴露在细胞 膜表面，可以用PS 与抗凝 血剂Annexin V 的相互作用 检测外翻的PS 6. 检测细胞膜成分变化 14 （三）细胞凋亡的生理意义 ? 生长发育：组织与器官的塑造（趾的分化）；动 物变态；皮肤角质形成； ? 免疫细胞分化：克隆选择 ? 防御：清除衰老细胞、DNA损伤的细胞、以及被 病原体感染的细胞。 15 细胞凋亡使得神经细胞与靶细胞的数量相匹配 肌细胞分泌神经生长因子（nerves growth factor, NGF） 16 动物蜕变过程中幼体器官的缩小和退化 （如蝌蚪尾的消失等）也是通过细胞凋亡来实现的 高等哺乳类动物指（趾）间蹼的消失、颚 融合、肠管腔道的形 成、视网膜发育等过程都必须有细胞凋亡的参与 动物发育过程中的细胞凋亡 17 18 细胞凋亡参与了免疫耐受的形成 细胞凋亡剔除被病原体感染的细胞 19 （四）细胞凋亡的分子机制 引起细胞凋亡的因素： ① 物理性因子：包括射线（紫外线，? 射线等），较温和的温度刺激 ② 化学及生物因子：活性氧，DNA 和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生 长因子，肿瘤坏死因子 ?（TNF