电离辐射诱导T淋巴细胞的差异蛋白质组学研究.pdfVIP

Vol. 31 2010 年 6 月 高等学校化学学报 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSπTES 电离辐射诱导 T 淋巴细胞的 差异蛋白质组学研究 梁峰1 ，石莹2，张莹3 ，刘忠英1 ，刘志强2 No.6 1143 -1147 (1.吉林大学药学院，长春 13∞21; 2. 中国科学院长春应用化学研究所，长春质谱中心，长春 13∞22; 3. 吉林大学公共卫生学院，长春 13∞21) 摘要应用电离辐射诱导人类 T淋巴细胞白血病 Jurkat 细胞株，再经二维凝胶电泳分离不同照射剂量的细 胞总蛋白，研究电离辐射诱导的人类 T淋巴细胞白血病细胞蛋白的差异表达.应用基质辅助激光解吸电离 飞行时间质谱( MALDI-TOF-MS)进行处理，得到肤质量指纹(PMF) 图谱，确认6 个差异表达蛋白点. 关键词 蛋白质组:二维凝肢电泳 z 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱; Jurkat 细胞 中固分类号 0657.63 文献标i只码 A 文章编号 0251 -0790 ( 201 0) 06-1143 -05 白血病是我国 10 种高发恶性肿瘤之一，在青壮年( 35 岁以下)和儿童恶性肿瘤发生率中居首 位[1] 白血病通常被认为是基因类型疾病，也是一种与蛋白质组相关的疾病.一个正常细胞在转变为 肿瘤细胞的过程中，细胞内蛋白质表达谱会发生一系列显著变化.而电离辐射可有效模拟肿瘤形成的 外在条件，同时也是恶性肿瘤尤其是白血病形成的客观原因.研究白血病发生过程中蛋白质种类、数 量的改变，不仅有助于进一步揭示白血病的发病机制，而且可通过质谱学方法鉴别出使正常淋巴细胞 转化为癌细胞的蛋白质，进而开发出检测白血病标志物的实验技术，以实现白血病诊断方面的实质性 突破.目前，以双向电泳及质谱分析为主的蛋白质组学方法为白血病实验诊断研究提供了良好的技术 平台.本文以 X 射线为照射源，研究 X射线达到一定的照射剂量时所导致的细胞损伤，及白血病的细 胞内损伤变化的过程.对辐射后 T 淋巴细胞(Jurkat 株)与正常 T 淋巴细胞(Jurkat 株)之间蛋白质的差 异表达进行了研究鉴定和质谱分析. 1 实验部分 1.1 试剂与仪器 IPG 预审!胶条(pH =5 斗， 17 cm) 、载体两性电解质(Bio-Lyte 3-10) 及矿物油( Miner回1 oil) 均购于 Bio-Rad 公司; Urea 、 Glycerol 、 Tris 、 3-[ ( 3-cholamiclopropyl ) -dime由ylammonio ] -1-propane sulfonate (CHAPS) 、丙烯酷胶、甘氨酸、澳酣蓝、 Temramethylethylenediamine(四MED)及考马斯亮兰 G250 均购 于 Sigma 公司;乙腊和三氟乙酸购于 Fisher 公司;腆乙酿胶购于Fluka 公司;低熔点琼脂糖、甲叉双丙 烯酷腊、 Dithiothreitol ( Dπ)及 Tosyl-phenylalanyl吃hloromethyl-ketone ( TPCK)修饰的测序级膜酶均购自 Promega 公司. Voyager~DE STR 型 MALDI-TOF 质谱仪(Applied Biosystem. ABI , USA). 1. 2 实验过程 1. 2.1 细胞培养、样品制备及蛋白浓度测定 Jurkat 细胞系由吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物 学重点实验室常规保存.将 Jurkat 细胞置于质量分数 159奋胎牛血清( Invitrogen 公司，澳大利亚)的 Ro- swell Park Memorial Institute( RPMI) 1创0 培养液(GiBCO 公司，美国纽约)中，于 37 C. 5%C02 的饱和 湿度的培养箱中培养，待细胞数达到 108时，于细胞传代后 12 h 给予 4 Gy X 射线照射，照射 18 h 后收 收稿日;朔: 2∞9-11 .m. 基金项目:国家自然科学基金(批准号: 20675σ79. 306726阳)资助. 联系人简介:刘志强，男，博士，研究员，博士生导师，主要从事天然药物化学与有机质谱学研究. E-mail: li叫@ciac.jl. cn 1144 高等学校化学学报 VO).31 集细胞，以假照射细胞作为对照.待细胞数达到)08时，收集细胞.照射条件为管电压 180 kV ，电流 15 mA，滤板 0.5 mm Cu 和1. 0 mm Al; 75 mGy 组:靶皮距212 cm，吸收剂量率 12.5 mGy/min; 0.5 -6.0 Gy 组:草也应距 56 cm，吸收剂量率0.287 Gy/min. 用