SD大鼠脊髓损伤前后外周血和损伤局部T淋巴细胞亚群的变化.pdfVIP

SD 大鼠脊髓损伤前后外周血和损伤局部T 淋巴细胞亚群的变 化 中 文 摘 要 研究背景：传统的观点认为CNS 损伤后的自身免疫反应会加重继发性损害不利 于神神经再生。近年来，以色列研究小组提出“保护性自身免疫”学说，即CNS 损伤后的自身免疫反应同时具有神经保护和促进神经再生的积极作用。我们认为 导致学术界争论不休的原因：SCI 后外周血和损伤局部的T 淋巴细胞可能存在不同 的功能亚群，有的亚群具有神经保护性潜能，而另外的则可能具有神经损害潜能， SCI 后功能恢复的最终结果可能要决定于这些不同细胞亚群之间的平衡。 目的：检测SD 大鼠脊髓损伤前及损伤后不同时间外周血及损伤局部T 淋巴细胞 亚群的变化，并对这些细胞亚群的变化及功能作用和机制进行初步探讨。 方法：1. 用纽约大学脊髓撞击仪，SD 大鼠制备中等程度撞击损伤的脊髓损伤动 物模型并评估其效果。 2. 用流式细胞仪、CD3-FITC 、CD8-PE 、CD4-PE 、CD25-Percp 、FOXP3-APC 检测 SCI 前后外周血CD3、CD4T、CD8T 细胞亚群和Treg 细胞亚群。 3. 用密度梯度离心方法分离新鲜脊髓局部浸润的淋巴细胞，用流式细胞术检测SCI 前后CD3CD8 阳性、CD3CD4 阳性和Treg 细胞亚群。 4.采用CD4 和FoxP3 双色免疫荧光标记抗体，检测SCI 前后局部浸润的CD4 阳性 细胞和Treg 细胞。 结果： 1. 用纽约大学脊髓撞击仪10g*25mm 撞击SD 大鼠的T9 脊髓致SD 大鼠双下肢肌 力活动丧失，造成截瘫。病理观察有显著差异，中等程度撞击损伤的脊髓损伤动 物模型成功制备。 + + + + 2.SCI 前后不同时间点SD 大鼠外周血CD3 CD8 /CD3 ，Treg/CD4 比例无明显化， + + + 无显著性差异（p 0.05 ）。SCI 后1、3、5 天，1 周的CD3 T 细胞，CD3 CD4 T + + + + 细胞比例，以及 CD3 CD4 / CD3 CD8 比值明显低于 SCI 前有显著性差异（p 0.05 ）。在SCI 后2 周，上述各T 细胞亚群的比例均恢复到术前水平，两时间点之 1 间比较无显著性差异（p 0.05 ）。 3. 流式细胞术检测正常SD大鼠脊髓局部检测不出CD3 阳性T细胞，损伤后检测到 浸润的CD3阳性细胞，其中局部CD4阳性T细胞术后第3天分别与术后第1、3周之间 有显著差异(p0.05) ，脊髓损伤局部CD4 阳性T细胞术后第1周与术后第3周之间有 显著差异(p0.05)，CD8阳性T细胞的比例在术后第3天分别与术后第1、3周之间有 显著差异(p0.05)，Treg 的比例在术后第2周较高分别与第3天、第1周、第3周之间 有显著差异性(P0.05) 。 4.采用组织免疫荧光染色技术检测正常SD 大鼠脊髓检测未发现CD4+ ，Treg 细胞， 局部 CD4 细胞数量除了 SCI 术后 1 周与术后第 2 周、第 3 周之间比较无差异 (p0.05) ，余各个时间点两两之间有显著性差异(p0.05) ，局部Treg 细胞数量除了 SCI 术后 1 周与术后3 周之间比较无差异外(p0.05) ，余各个时间点两两之间有显 著性差异(p0.05) ，局部Treg/CD4 比值SCI 后第 1 天和2 周两个高峰之间无差异 p0.05 ，SCI 后3 天，1 周，3 周之间无差异(p0.05) ，余各个时间点两两之间有显 著性差异(p0.05) 。 结论： 1. 用纽约大学脊髓撞击仪制备 SD 大鼠的中等程度撞击损伤的脊髓损伤动物模型 是较理想可靠的方法。