膀胱癌多药耐药的流式细胞术分析.docVIP

膀胱癌多药耐药的流式细胞术分析 　　本实验旨在 研究 流式细胞术(flow cytometry,FCM)在膀胱癌细胞的多药耐药 分析 方面的作用，现报道如下。 　　一、材料与 方法 　　1.试剂及仪器：DMEM、DNA提取试剂盒DNAzol、RNA提取试剂盒Trizol为Gibco产品；秋水仙素、甲酰胺、polybrene为Sigma产品；缺口平移系统(nick translation)为Promega产品，尼龙膜为Zeta Probe产品；鲑鱼精DNA购自晶美生物公司；MDR-1 pCR引物P1：5′CCCATCATTGCAATAGCAGC-3′,P2:5′-CTTCAAACTTCTGCTCC 　　tGA-3′［1］，由军事医学 科学 院放射医学研究所合成；抗P-gp单克隆抗体JSB1购自福州迈新公司；FITC标记羊抗鼠IgG购自北京中山生物技术公司；阿霉素由法玛西亚公司福建办事处提供；FCM检测由北京中医研究院西苑 医院 流式细胞室完成。 　　2.细胞株：转导人mdr-1 cDNA的逆转录病毒包装细胞PA317/PHamdr-1/A由本室保存［1］。人膀胱癌细胞株EJ由北京医科大学泌尿外科研究所提供。以上细胞均生长于DMEM培养基中，其中含体积分数为10%的胎牛血清和200 mmol/L的L-谷氨酰胺，在体积分数为5%的CO2、37培养箱中培养。逆转录病毒转染EJ