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　　CD14基因启动子多态性与冠心病的关系论文 韦叶生，刘运广，唐任光，蓝景生 【关键词】 冠状动脉疾病 Association betoter region polymorphisms and coronary heart disease 【Abstract】 AIM: To study the allele frequencies and genotype distribution of CD14 gene promoter region -159C/T, -260C/T polymorphisms in Chinese patients levels and genotypes of CD14 and CHD. METHODS： The polymorphisms of CD14 gene erase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCRRFLP) methods in 246 patients levels of CD14 ined by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS： The CHD group sho levels of CD14 than control group (P 0.01); The distribution of CD14 gene -159C/T polymorphism orphism es as high as that in C allele carriers (OR=1.417，95%CI：1.106-1.816）, and the serum level of CD14 in T allele carriers oter region -260C/T polymorphism is associated ay be a risk factor for CHD; so T allele carriers have a higher risk for CHD by increasing the CD14 expression. 【Keyorphism 【摘要】 目的： 研究白细胞分化抗原14(CD14)基因启动子159C/T，260C/T多态性各等位基因及基因型在冠心病患者中的分布频率，分析CD14基因型及血清CD14水平与冠心病的相关性. 方法： 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术，检测246例冠心病患者及258名正常人对照组CD14的基因多态性.freelmol/L dNTPs 4.0 μL，上、下游引物各40 pmol/L，模板DNA 10.0 μL，TaqDNA聚合酶2.5 U，不足体积用灭菌双蒸水补足至50 μL. 置热循环仪(TC48/H型)中94℃预变性3 min；再按下列程序循环35次，即94℃变性45 s，59℃退火1 min，72℃延伸1 min；末次循环后，72℃延伸5 min. 分别取PCR扩增产物10 μL，用5 U限制性内切酶Ava II酶切CD14基因159位点，37℃孵育2 h；用5 U限制性内切酶Hae III酶切CD14基因260位点，37℃孵育3 h，反应终止后，消化片段分别在20和25 g/L琼脂糖凝胶上电泳，EB染色，染色后经紫外灯判断结果并拍照. 采用ELISA测定可溶性CD14(sCD14)的血清水平，每次测定均严格按说明书操作. 酶法测定血清总胆固醇（TC）和甘油三酯(TG)；遮蔽法直接测定高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)；apoAI，apoB用双波长免疫透射比浊法测定. 以上测定均在7060型(日本产)全自动生化分析仪上进行，每次测定均选用高、中、低3种质控样品进行质控，以上项目检测质控均符合英国RIQAS国际质控标准. 统计学处理： 用SPSS 10.0软件包进行分析. 基因型和等位基因频率采用基因直接计数法计算，各组间基因型及等位基因频率比较采用χ2检验，并以比值比（OR）及其95%可信区间（95%CI）估计相对危险度. 计量资料用x±s或Md（QR）表示，各组间指标比较依据指标性质，用t检验、非参数秩和检验. P 0.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1CD14基因型分析CD14基因159C/T多态性，PCR扩增产物片段大小为497 bp，根据限制性内切酶Ava II酶切片段的情况，基因型有3种，CC型（497 bp 1条带），CT型（497 bp，353 bp，144 bp 3条带），TT型（353 bp，144 bp 2条带）；CD14基因-260C/T多态性，PCR扩增产物片段大小为268 bp，根据限制