PDECGF特异性RNA抑制片段诱导裸鼠膀胱癌细胞凋亡的研究论文.docVIP

　　PDECGF特异性RNA抑制片段诱导裸鼠膀胱癌细胞凋亡的研究论文 金宁 张灵 肖博晗 常喜华 【摘要】 目的 利用RNA干扰技术在裸鼠膀胱癌动物模型中通过抑制靶向沉默血小板源性内皮生长因子基因（PDECGF）的表达，探讨其在活体动物肿瘤组织中的作用。方法 将psiPDECGF1及2稳定转染的阳性T24细胞株及其他对照组直接接种于裸鼠皮下，观察肿瘤细胞生长及成瘤情况、测定肿瘤体积的变化；免疫组化检查PDECGF蛋白表达；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果 裸鼠体内成瘤实验发现siRNA2组第21天时成瘤率只有50%，而其他各组成瘤率为100%。siRNA2组生长速度明显慢于其他3组，siRNA2组不仅成瘤延迟，且生长速度明显慢于其他3组(P＜0.01)。免疫组化证实siRNA2组肿瘤组织PDECGF 蛋白表达最低; TUNEL检测siRNA2组细胞凋亡数明显多于其他3组 (P＜0.05)。结论 PDECGF siRNA载体稳定转染细胞株体内实验可见膀胱癌细胞成瘤率降低，成瘤延迟及肿瘤生长速度减慢，癌细胞凋亡增多。PDECGF siRNA在裸鼠体内依然对膀胱癌细胞有明显抑制作用。 【关键词】 膀胱癌；PDECGF；RNA干扰；凋亡 【Abstract】 Objective To research the PDECGF gene′s function on the animal tumor by inhibiting the expression of the PDECGF in the nude mice bladder carcinoma animal model via siRNA system.Methods The bladder carcinoma nude mice model a cells to observe tumors groor cells apoptosis by TUNEL kit or cells.Results The form rate of tumor or experiment in vivo. The rate of form tumor ost than that of other groups significantly (P＜0.05). Conclusions PDECGF siRNA can still depress the bladder tumor in nude mice or forming rate and prolonged tumor forming time and the reduced tumor groa; PDECGF；RNA interference; Apoptosis 血管内皮生长因子（VEGF）与血管形成密切相关.freell培养瓶培养各组稳定转染的细胞直至对数生长期，0.25%胰酶消化并计数，离心后取200 μ1(1×105个细胞/μl)悬浮细胞，加入不含血清的DMEM制成细胞悬液，选择裸鼠右侧臀部外侧，消毒后进行皮下注射；每日观察成瘤情况，成瘤后每3 d称量裸鼠体重及测量肿瘤大小，记录肿瘤潜伏期及绘制肿瘤生长曲线，计算成瘤率、肿瘤抑制率和肿瘤生长指数。第30日脱颈法处死裸鼠，解剖取肿瘤组织，称重，做病理切片检查。用公式分别计算肿瘤体积、肿瘤抑制率和肿瘤生长指数。计算公式如下：肿瘤体积=肿瘤长径×肿瘤短径2×0.5。肿瘤抑制率(%)= (对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。 1.3 裸鼠肿瘤组织切片HE染色 瘤体常规福尔马林固定，制作石蜡切片；脱蜡后，苏木精染色10 min，水冲洗后，加盐酸酒精(1%盐酸，70%酒精)8 min，自来水冲洗15 min，逐级脱水，70%，80%，90%酒精各5 min，进行伊红染色5 min，再浸入90%酒精5 min，2次100%酒精各5 min，脱水干燥，封片照相。 1.4 裸鼠肿瘤组织PDECGF免疫组化 按照常规方法进行。一抗孵育浓度为1∶50(PBS稀释)，生物素化的二抗孵育浓度为1∶200，计算机病理切片图像采集和分析，每张切片免疫组化半定量分析，取5个高倍镜下视野(×400)，统计图片阳性染色细胞的平均积分光密度(IOD)值，以判断阳性染色的差异。 1.5 TUNEL法检测凋亡细胞数 采用TUNEL反应检测试剂盒测定肿瘤组织细胞内DNA的片段化，按说明书操作。400倍光学显微镜下观察，随机选取5个视野，每个视野计算100个细胞，平均每100个细胞中凋亡细胞的个数为凋亡率 (AI)。 1.6 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件包进行g。siRNA2组的肿瘤抑制率（56.43%）明显高于空载体组（2.05%）和siRNA1组（6.93%）(P＜0.