高效液相色谱设计方案.docVIP

药物分析设计性实验 药学2011级（2）班 李 智（1103501275） 李集毅（1103501276） 指导教师：周漩 2014 年 4 月 高效液相色谱测定维生素C片剂含量 一、实验目的 1. 掌握一般药物含量测定实验的设计方法 2. 掌握维生素C高效液相色谱法含量测定的原理和方法 3. 掌握标准曲线法在药品含量测定检验中的运用 二、实验器材 仪器：岛津高效液相色谱仪,色谱柱C18;电子天平;烧杯,棕色容量瓶（50ml*7） 0.145μm滤膜，棕色容量瓶（20ml*2） 试剂：维生素C片（0.1g/片）（市售），维生素C标准对照品（0.1mg/ml）;二次蒸馏水，甲醇（0.1mg/ml色谱纯），草酸（分析纯），磷酸二氢钾（分析纯），磷酸氢二钾（分析纯） 三、实验原理 1. 标准曲线法：采用梯度浓度稀释法，将对照品溶液稀释至不同浓度的待测溶液，制备成标准溶液，用高效液相色谱法按标准进样得样品吸收峰（峰面积），绘制成标准曲线。 2. 将供试品制剂制成规定含量的待测品，进行高效液相色谱测定，对比对照品溶液标准曲线，查看供试品是否符合含量测定要求 四、实验内容 1色谱条件 色谱柱C18，流动相:磷酸盐缓冲溶液(pH=5.18):甲醇=95：5,流速0.18ml/min,紫外检测器,检测波长254 nm,进样10ul。 2供试品溶液与对照品溶液的制备 （1）取本品20片(规格0.1g),精密称定,研细,取本品1片(约相当于维生素C100mg)，将待测样品用0.1%的草酸溶解至20ml容量瓶，定容；取上述样品1ml于50ml的容量瓶中，用0.1%的草酸精确定容，制成每1ml含0.1mg的溶液，分析前用0.145μm滤膜过滤。 （2）维生素C对照品溶液的制备:精密称取维生素C对照品适量,加0.1%的草酸使溶解制成0.1mg/ml的标准溶液。 3 标准工作曲线的绘制 精密称取对照品50.80mg置50ml量瓶中,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,精密量取0.5ml,2.5ml,5ml,12.5ml,25ml 分别置50ml量瓶中,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,制成维生素C标准溶液,用0.45um滤膜过滤,用微量进样器进样10ul,依次测出峰面积,然后以维生素C标准溶液质量浓度(mg/ml)作自变量,相对应的峰面积作因变量,绘制标准工作曲线,标准曲线的相关系数R=0.9999,说明曲线的线性关系良好。 4 计算维生素C片的标示量% 根据《中国药典》本品含维生素C（C6H8O6)应为标示量90.0%～110.0% 计算方法：y=aC+b 五、注意事项 1.维生素Ｃ溶液热稳定性较差,在中性或碱性水溶液中易被氧化,但在酸性溶液中却很稳定,因此用0.1%草酸溶液作溶剂来溶解样品及标样。 2.由于维生素Ｃ对光不稳定,遇氧易分解,故本实验应避光操作,整个实验均用棕色容量瓶定容[2],流动相脱气后尽量不要引起气泡。 3.维生素C溶液需现用现配,且最好在2 h内使用,超过2 h,所以配制的VC溶液可能因为氧化降解而导致溶度下降,从而影响实验结果。 六思考题1．高效液相色谱测维生素C的优缺点? 答:维生素C测定的方法一般有化学法、比色法、紫外分光光度法、荧光法等,这些方法所需试剂较多、操作繁琐,由上述分析可知,采用高效液相色谱法测定维生素C片的含量是可靠的,操作简便、快速、稳定,结果准确可靠。 2 溶解试样时，为什么要加入新煮沸的冷蒸馏水？ 答:维生素C的E°＝0.18V，凡能被I2直接氧化的物质均有干扰。此试样平行测定的精密度不高，故本实验要求适当放宽一点。 参考文献 【1】 王 蕊,姜 丽,袁 航,孙学志,曹 阳. 高效液相色谱法测定维生素C片的含量 【J】. 黑龙江医药,2010,23(6):876-877.