血小板衍生微粒对脐血粒巨噬祖细胞的促增殖作用论文.docVIP

　　血小板衍生微粒对脐血粒巨噬祖细胞的促增殖作用论文 .freell凝血酶激活血小板后的PMP释放率分别为： 28.7%、47.7%、50.1%和43.9%；CFU-GM集落产率与PMP呈剂量依赖关系，PMP为10、50、100 μg/ml时的CFU-GM集落产率（个/2×105 MNC）分别为：119.8±32.2、142.8±45.2、180.8±85.1。50、100 μg/ml PMP组的集落产率与空白对照组（103.0±24.8）相比，P值均 0.05；而10 μg/ml PMP组的集落产率略高于空白对照组，但P值 0.05。结论： 用1.0 U/ml的凝血酶激活血小板释放的PMP较为均一，而且释放量最大。PMP可促进人脐血粒巨噬祖细胞的增殖。 【关键词】 血小板衍生微粒 Abstract This study ed to investigate the effect of platelet-derived microparticles (PMP) on stimulating the proliferation of granulocyte-macrophage progenitors (CFU-GM) from umbilical cord blood. Different concentrations of thrombin etry bin to produce PMP. Umbilical cord blood mononuclear cells (MNC) healthy donors and the MNC ethylcellulose containing different concentration of PMP and colonies icroscope after 7 days. The result shol thrombin ation in dose-dependent manner. The number of colonies per 2×105 MNCs in groups of PMP at different concentrations (10，50 and 100μg/ml) ber of colonies in the groups of PMP at 100 μg/ml and 50 μg/ml ber of colonies per 2×105 MNC in the group of PMP (10 μg/ml) l thrombin can get the best release efficiency of PMP and PMP can enhance the proliferation of granulocyte-macrophage progenitor cells of umbilical cord blood Key icroparticles; cord blood; granulocyte-macrophage progenitor cell 血小板衍生微粒（platelet-derived microparticles，PMP）是血小板激活后产生的直径为0.1-1.0 μm的小囊泡颗粒，含有多种特异性膜糖蛋白和生物学活性的受体，可通过与靶细胞的相互作用启动靶细胞的生物学效应。研究表明，PMP可影响人类造血干细胞的多种功能：PMP可通过转移CD41抗原增强骨髓来源的造血干细胞对胶原蛋白的黏附能力；通过其表面CD40配体来增强骨髓来源的造血干细胞的生存能力；促进骨髓移植后免疫系统和造血功能的恢复等［1］。本实验将PMP与人脐血造血干细胞共同孵育，以观察PMP对脐血粒巨噬祖细胞集落生长的影响。 材料和方法 样品来源 10份脐血样品由南京大学医学院附属鼓楼医院产科提供。选择健康足月妊娠的产妇，胎儿娩出后立即结扎脐带，消毒后穿刺脐静脉，通过重力作用将脐血收集于200 ml抗凝的采血袋中；采血量为80-100 ml，4℃保存，8小时内分离单个核细胞（mononuclear cells，MNC）；血小板悬液由江苏省血液中心成份科提供，均为血细胞分离机采集的健康供血者的血小板。 试剂与仪器 重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)购自厦门特保生物工程股份有限公司；白介素－3(IL-3)购自晶美公司；甲基纤维素为Sigma公司产品；IMDM为Gibco公司产品；淋巴细胞分离液（Ficoll，1.077）购自上海恒信公司；流式细胞仪为Becton Dickinson公司产品；标记抗体CD61-FITC为Immunotech公司产品；BCA蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。 脐血单个核细胞的分离 留取的脐血样品经1 100