施氏鲟出血性败血症病原菌的分离和鉴定.pdfVIP

第26卷第6期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．26 No．6 2007年 12月 Journal of Huazhong Agricultural University Dec．2007。822～826 施氏鲟出血性败血症病原茵的分离和鉴定 孟 彦 。’ 肖汉兵¨ 张 林 ’ 李罗新。’ 曾令兵 (”中国水产科学研究院淡水生态与健康养殖重点开放实验室，荆州434000； 中国水产科学研究院长江水产研究所，荆州434000； 。’农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室，荆州434000) 摘要 从患典型出血性败血症死亡的施氏鲟(Acipenserschremkii Brandt)脾脏组织分离到1株致病性病原菌。 依Koch法则建立室内感染模型，一次感染试验和回归感染试验的试验组均可复制出与自然发病情况下相同的症 状，根据Reed-Muench法计算病原菌半数致死浓度为1．17×10 cfu／mL。对从自然发病和一次感染试验的病鱼体 内分离的致病菌进行形态和VITEK全自动细菌生理生化表型鉴定以及16S rRNA基因部分序列进化树分析，结 果表明导致施氏鲟出血性败血症的病原菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydroph )。药物敏感试验结果显示，该 病原菌对庆大霉素、环丙沙星、阿米卡星等药物敏感，对氨卞青霉素、舒巴坦、头孢唑啉等药物具有抗性。 关键词 施氏鲟；出血性败血症；病原；分离鉴定；嗜水气单胞菌 中图法分类号 S 941．42 文献标识码 A 文章编号 1000—2421(2007)05—0822—05 ． 施氏鲟(Acipenser schrenckii Brandt)原产于我 1 材料与方法 国黑龙江和俄罗斯乌苏里江，因其在资源保护、食用 以及生产鱼籽酱等方面具有重要科学意义和经济价 1．1 试验材料 值而备受关注。近年来，由于过渡捕捞和生存环境 1)试验鱼。具有典型出血性败血症症状的病鱼 的改变致使施氏鲟种群数量日趋下降。随着施氏鲟 采自湖北省秭归县某施氏鲟养殖场。健康试验鱼取 南移驯养成功，施氏鲟人工养殖技术和规模发展迅 自长江水产研究所鲟鱼繁育基地，体重约0．2 ， 速，全国施氏鲟年产量已超过数万吨(据不完全统 体长15～20 cm。健康施氏鲟在实验室于充氧、水 温22~25 oC的水族箱内饲养1周后进行试验。 计)。然而，随着人工养殖规模的不断扩大和集约化 2)细菌分离培养及分子生物学试剂。酵母提取 程度的不断提高，施氏鲟病害问题日趋严重，细菌、 物、胰蛋白胨、DPBS缓冲液(dulbecco’S phosphate 真菌、病毒和寄生虫等多种水产病原均可使施氏鲟 buffered saline)、琼脂糖等试剂购自Sigma公司。 感染而导致大量死亡l_l ]，造成重大经济损失。 细菌总基因组提取利用Sigma公司的GenElute 近年来，在湖北、江西、重庆、贵州等地施氏鲟出 Bacterial Genomic DNA Kit。PCR扩增试剂盒用 血性败血症大面积暴发。该病发病率、死亡率很高， Promaga公司的PCR Core System Ⅱ。PCR产物 患病鱼体表充血，腹部肿胀，剖检后腹腔内有大量 纯化采用OMEGA公司的Gel Extraction Kit。 腹水，肠道充血或失血，肝脏有出血点