骨肉瘤细胞系中Runx3及Runx2基因表达分析.pdfVIP

长江大学学报 (自科版)医学卷 2007年12月第4卷第4期 Journal of Yangtze University(Nat Sci Edit)Medicine V Dec．2007，Vo1．4 No．4 ·325· 骨肉瘤细胞系中Runx3及Runx2基因表达分析 张海元，刘 娟 (长江大学医学院，湖北荆州434000) [摘要]目的：检测在8种骨肉瘤细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态和Runx2基因及Runx3基 因的表达情况，探讨Runx2基因和Runx3基因对骨肉瘤形成的影响。方法：采用甲基化特异PCR(MSP) 对8种骨肉瘤细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态进行分析，采用逆转录一多聚合酶链反应 (RT_ PCR)检测Runx3及 Runx2基因的表达情况。结果：MSP结果显示，Runx3基因启动子区域无明显过甲 基化状态发生，RT_PCR结果表明，大多数骨肉瘤细胞系中Runx2基因和Runx3基因均有不同程度表达。 结论：在骨肉瘤细胞系中无明显的Runx3基因特异性表达异常，Runx3基因启动子区域未见CpG岛发生 广泛甲基化等表观遗传学异常改变，提示Runx3基因与骨肉瘤的发生发展无必要联系。Runx2基因虽然 在成骨细胞分化、软骨细胞成熟及骨基质蛋白产生中发挥重要作用，但在骨肉瘤细胞系中均有不同程度 的表达。 [关键词]Runx基因；基因表达；骨肉瘤；甲基化特异PCR分析；甲基化；表观遗传学 [中图分类号]R341 [文献标识码]A [文章编号]1673—1409(2007)04一R325一O3 骨肉瘤 (osteosarcoma)是一类多基因性疾病，可能由于癌基因激活或抑癌基因失活等多种因素所 致的综合病变过程，其中抑癌基因失活在肿瘤发生、发展中起着非常重要的作用。Runx基因 (runt—re- lated transcription factor gene)是近年来发现的一种新型抑癌基因，与人类多种肿瘤的发生、发展有着 极其密切的关系。DNA甲基化是真核生物表观遗传学修饰的重要调节方式，对基因的表达和调控起着 非常重要的作用。我们采用MSP方法检测8种骨肉瘤细胞系中Runx3基因启动子区域的甲基化情况， 采用RT-PCR方法了解Runx3基因和Runx2基因在骨肉瘤细胞系中的表达情况，来探讨Runx3基因和 Runx2基因的表达产物与骨肉瘤的发生、发展的关系。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 细胞系 选用 8种骨肉瘤细胞系：MG63、Saos2、G292、Hs919T、Hs888T、Hs86OT、 Hs7O7A、HOS等，细胞系来源于新加坡国立大学肿瘤研究中心。 1．1．2 试剂 RPMI1640、DMEM培养液，1O 牛血清蛋白等均购自Invitrogen公司；QIAamp RNA 抽提试剂盒购自Qiagen公司；反转录酶 (SuperScript II RNase H-Reverse Transcriptase)购自Gibeo 公司；Protector RNase Inhibitor购自Roche公司；Hotstar Taq Master Mix Kit购自Qiagen公司； DNeasy kit购自Qiagen公司；MieroSpinTMS-200HR Columns购自Amersham公司；肝糖原 (Glyeo— gen)购自Invitrogen公司。 1．2 方法 1．2．1 细胞培养 8种骨肉瘤细胞系分别用含有lO 牛血清蛋白的RPMI1640或DMEM培养液在 37℃CO 培养箱培养。 1．2．2 RNA抽提 分别收集八种细胞系，按照QIAamp RNA抽提试剂盒说明书提取总RNA。 1．2．3 RT-PCR 每种细胞系的总RNA各取5 g，通过反转录酶 (SuperScript II RNase H—Reverse Transcriptase)进行逆转录；设计Runx3引物PsCA、PsCB，设计Runx2引物Runx2R、Runx2F，用 B—actin作为对照，进行RT—PCR，反应条件为：95℃15 min，95℃30 S，55℃30 S，72℃45 S，30 [收稿日期]2007一O6—11 [作者简介]张海元(1974一)，男，湖北鄂州人，讲师，从事肿瘤分子生物学教学与研究工作。 ·326· 张海元等：骨肉瘤细胞系中Runx3及Runx2基因表达分析