以木糖异构酶基因为筛选标记的玉米遗传转化.pdfVIP

植物生理与分子生物学学报，Journal ofPlant Physiology and Molecular Biology 2007，33(6)：547-552 547 以木糖异构酶基因为筛选标记的玉米遗传转化 郭新梅 ，张晓东 ，梁荣奇 ，张立全 ，陈耀锋。 ’北京市农林科学院农业生物技术研究中心，北京100097； 青岛农业大学生命科学学院，青岛266109； 西北农林科技大学农学院，杨 凌712100 摘要：利用木糖异构酶基因作为筛选标记可以在含有不 过木糖异构酶(XylA)将木糖一步转化为木酮糖，并 同浓度木糖的培养基上筛选出玉米再生植株，其中 且不需要任何辅助因子。Vieille等(1995，2001)成功 50％ 100％木糖浓度的总体筛选效果较好，但不同玉米 地克隆并表达了由木糖异构酶基因(xyIA)编码的一个 基因型之间筛选的最佳浓度差异很大。通过DNA点杂交、 PCR及PCR．Southern印记法检测表明，木糖异构酶基因 具有444个氨基酸残基、分子量为50．892 kD的多 已经整合到转基因植株中。以木糖作为筛选荆，可以减小 肽。该酶最适pH为7．1，但在较宽的pH范围内活 潜在的生物安全隐患。 性都很高(Sriprapundh等2003)。Haldrup等(1998a， b)将木糖异构酶基因(xyIA)分别转到马铃薯、烟草和 关键词：木糖；木糖异构酶；筛选标记基因：玉米 番茄的愈伤组织中，然后将愈伤组织置于含有木糖 中图分类号：Q74 的培养基上进行筛选，得到了能够在该培养基上正 常生长的转基因植株。Haldrup等(1998a，b)的研究 自1983年第一株转基因植物诞生以来，全球抗 证明，以木糖异构酶基因为选择标记进行正向选 虫、抗病、抗除草剂和品质改良的棉花、水稻、 择，其筛选效率比用卡那霉素为筛选剂的选择系统 大豆、玉米等转基因植物已达120多种，种植面积 高1O倍左右。以除草剂为筛选剂的体系延长了愈伤 9 000万公顷。在基因工程中将外源目的基因导入植 组织继代时间，愈伤组织生长分化能力下降，降低 物体，并筛选出极少量的转化细胞，建立一套高效 了转化效率。目前还未见将木糖异构酶作为筛选标 安全的选择方法甚为重要。现在广泛用于选择的标 记用于玉米等作物的文献资料。 记基因主要有2大类：一类是抗生素抗性基因，包括 大肠杆菌具有能催化木糖异构化的木糖异构 新霉素磷酸转移酶基因(npt)、潮霉素磷酸转移酶基 酶，木糖被木糖异构酶催化转变为木酮糖，再经磷 因(hpf)、卡那霉素抗性基因(nptl1)等；另一类是除草 酸戊糖途径为细菌生长所利用。玉米等高等植物细 剂抗性基因，包括草丁膦抗性基因(bar)、草甘膦 胞不能利用D一木糖作为惟一碳源，然而在外源木糖 抗性基因(epsp)等。转基因植物中的这些具有抗生 异构酶的催化下，木糖能转变成木酮糖，然后再经 素或除草剂抗性的标记基因是否会对人类健康有不