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以木糖异构酶基因为筛选标记的玉米遗传转化.pdf
植物生理与分子生物学学报,Journal ofPlant Physiology and Molecular Biology 2007,33(6):547-552 547
以木糖异构酶基因为筛选标记的玉米遗传转化
郭新梅 ,张晓东 ,梁荣奇 ,张立全 ,陈耀锋。
’北京市农林科学院农业生物技术研究中心,北京100097; 青岛农业大学生命科学学院,青岛266109; 西北农林科技大学农学院,杨
凌712100
摘要:利用木糖异构酶基因作为筛选标记可以在含有不 过木糖异构酶(XylA)将木糖一步转化为木酮糖,并
同浓度木糖的培养基上筛选出玉米再生植株,其中 且不需要任何辅助因子。Vieille等(1995,2001)成功
50% 100%木糖浓度的总体筛选效果较好,但不同玉米
地克隆并表达了由木糖异构酶基因(xyIA)编码的一个
基因型之间筛选的最佳浓度差异很大。通过DNA点杂交、
PCR及PCR.Southern印记法检测表明,木糖异构酶基因 具有444个氨基酸残基、分子量为50.892 kD的多
已经整合到转基因植株中。以木糖作为筛选荆,可以减小 肽。该酶最适pH为7.1,但在较宽的pH范围内活
潜在的生物安全隐患。 性都很高(Sriprapundh等2003)。Haldrup等(1998a,
b)将木糖异构酶基因(xyIA)分别转到马铃薯、烟草和
关键词:木糖;木糖异构酶;筛选标记基因:玉米 番茄的愈伤组织中,然后将愈伤组织置于含有木糖
中图分类号:Q74
的培养基上进行筛选,得到了能够在该培养基上正
常生长的转基因植株。Haldrup等(1998a,b)的研究
自1983年第一株转基因植物诞生以来,全球抗
证明,以木糖异构酶基因为选择标记进行正向选
虫、抗病、抗除草剂和品质改良的棉花、水稻、
择,其筛选效率比用卡那霉素为筛选剂的选择系统
大豆、玉米等转基因植物已达120多种,种植面积
高1O倍左右。以除草剂为筛选剂的体系延长了愈伤
9 000万公顷。在基因工程中将外源目的基因导入植
组织继代时间,愈伤组织生长分化能力下降,降低
物体,并筛选出极少量的转化细胞,建立一套高效
了转化效率。目前还未见将木糖异构酶作为筛选标
安全的选择方法甚为重要。现在广泛用于选择的标
记用于玉米等作物的文献资料。
记基因主要有2大类:一类是抗生素抗性基因,包括
大肠杆菌具有能催化木糖异构化的木糖异构
新霉素磷酸转移酶基因(npt)、潮霉素磷酸转移酶基
酶,木糖被木糖异构酶催化转变为木酮糖,再经磷
因(hpf)、卡那霉素抗性基因(nptl1)等;另一类是除草
酸戊糖途径为细菌生长所利用。玉米等高等植物细
剂抗性基因,包括草丁膦抗性基因(bar)、草甘膦
胞不能利用D一木糖作为惟一碳源,然而在外源木糖
抗性基因(epsp)等。转基因植物中的这些具有抗生
异构酶的催化下,木糖能转变成木酮糖,然后再经
素或除草剂抗性的标记基因是否会对人类健康有不
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