2011年执业药师考试辅导《药物分析》讲义0601.docVIP

第六章　色谱法 　　考试要求： 色谱法 （一）色谱法基础 1.常用术语 色谱图、基线、色谱峰、保留值、色谱峰区域宽度、分配系数、容量因子 2.影响色谱分离的因素 （1）理论板数的计算及注意事项（2）影响柱效的主要因素 3.分类 （1）按分离原理分类（2）按分离方式分类 （二）薄层色谱法 1.仪器与材料 （1）常用的固定相与薄层板（2）点样器（3）展开容器（4）显色剂与显色装置（5）检视装置 2.操作方法 （1）薄层板的制备（2）点样与展开（3）显色与检视方法 3.色谱系统适用性试验 （1）检测灵敏度（2）比移值（3）分离效能 4.测定法与应用 （1）鉴别（2）杂质检查 （三）高效液相色谱法 1.分类 （1）正相分配色谱法（2）反相分配色谱法 2.高效液相色谱仪 （1）仪器的基本结构（2）常用检测器（3）常用固定相与流动相 3.色谱系统适用性试验 色谱柱理论板数、分离度、重复性和拖尾因子及其计算 4.测定法 内标法、外标法、主成分自身对照法、面积归一化法 5.应用 （1）鉴别（2）杂质检查（3）含量测定 （四）气相色谱法 1.气相色谱仪 （1）仪器的基本结构（2）进样方式（3）色谱柱（4）常用检测器（5）常用的固定相 2.色谱系统适用性试验 色谱柱理论板数、分离度、重复性和拖尾因子及其计算 3.测定法 内标法、外标法、面积归一化法、标准溶液加入法 4.应用 （1）鉴别（2）杂质检查（3）含量测定 （五）电泳法 1.基本原理 （1）电泳迁移速度与电泳淌度和电渗流的关系（2）影响电泳分离的因素 2.平板电泳法 纸电泳法、薄膜电泳法、凝胶电泳法 3.毛细管电泳法 主要分离模式及其特点 4.应用 在鉴别、分子量测定和纯度检查中的应用 第一节　色谱法基础 　　色谱法：是一种物理或物理化学分离方法，将混合物中各组分分离后在线或离线分析的方法。　　色谱的发现　　　　装有CaCO3的玻璃管叫做色谱柱 　　管内填充的CaCO3固定不动，称为固定相　　用来淋洗色素的石油醚不断地往下流动，称为流动相　　特点：高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快及应用范围广　　应用：分析混合物（定性鉴别、纯度检查、含量测定）。　　一、常用术语　　　　1.色谱图和色谱峰　　色谱图：色谱响应信号随时间的变化曲线称为流出曲线或色谱图。　　色谱峰：流出曲线上的突起部分称为色谱峰。有三种情况　　　　基线：在色谱分离过程中，没有组分流出时的流出曲线，即色谱图中无色谱峰的部分。　　描述色谱峰的参数　　①峰位（用保留值表示，用于定性）；　　②峰高或峰面积（用于定量）；　　③峰宽（用于衡量柱效）。　　2.保留值　　　　★保留时间 tR 从进样开始到某个组分色谱峰顶点的时间间隔称为该组分的保留时间。　　★死时间 t0 分配系数为零的组分的保留时间称为死时间 　　★调整保留时 t R = tR - t0 组分在固定相中停留的时间称为调整保留时间　　★相对保留值r2,1= t R2/ t R1= V R2/ V R1 两组分的调整保留值之比称为相对保留值　　3.色谱峰区域宽度　　　　★标准差 s 色谱峰上两拐点（0.607峰高处）间距离的一半。 　　★半峰宽 W1/2 =2.355 s 峰高一半处的峰宽称为半高峰宽。　　★峰底宽度W =4 s=1.699W1/2 色谱峰两侧的拐点作切线，在基线上的截距称为峰宽　　二、基本理论　　1.色谱分离过程　　分配系数：组分在固定相和流动相之间的分配平衡时的浓度之比。　　　　　　CS为平衡时组分在固定相中的浓度；Cm为平衡时组分在流动相中的浓度 　　K:与组分、固定相、流动相的性质及温度有关。　　容量因子：达到分配平衡后，组分在固定相和流动相中的质量之比。　　　　k: 与组分、固定相、流动相的性质及温度有关；与两相体积有关。　　（k比K更易测定，常用k代替K）　　kA≠kB 是分离的先决条件　　色谱分离过程　　是物质分子在相对运动的两相（固定相和流动相）间分配平衡的过程　　　　混合物种两组份之所以能够分离，是因为两个组分的分配系数（K）或容量因子（κ）不等——被流动相携带移动的速度不等——差速迁移，从而被分离。　　2.理论板数—塔板理论　　色谱柱的理论板数越多，柱效越高；同样长度的色谱柱中的板高越小，理论板数越多，柱效越高。　　　　理论塔板数的测算　　n=16 （ tR /W ）2 =5.54 （ tR /W1/2 ）2 　　理论塔板高度H 　　H =L / n　　例：某色谱柱长2m