荧光定量PCR法检测副溶血弧菌tdh基因的表达差异.pdfVIP

畜牧与兽医2008年第40卷第9期 ·9 · 荧 光 定 量 PCR法 检 测 副 溶 血 弧 菌 t dh基 因 的 表 达 差 异 王淑娜，方维焕 ’ ( 浙江大学动物预 防医学研究所 ，浙江省动物预 防医学重 点实验 室，浙江杭州3 10029) 摘要： 以∥ “为内标基因，运用实时荧光定量PCR检测不 同来源以及 不同应激 条件下副溶血弧菌热稳 定直接溶血素基因t ．dh的表达量。弘mA和 u ／h基 因的荧光定量PCR融解曲线分析表明，两者均为特 异性扩增。尽管相同来源的不同菌株间t dh 表达量存在显著差异，副溶血弧菌临床 分离 株的t dh mRNA平均表达量显著高于海产品分离株( (57 ．2 比13 ．8) 。在pH 4 ．0 、0 ．5 ％和8 ％Na CI 应激条件 下，临床株ZJ 2和海产 品分离株 FJ l 4A的t d ．h mRNA表达量显著高于对照组 ；另一海产品分离株KP34在8 ％Na Cl 条件下 的表达量显著提高 ，而低pH应激 时u ／h mRNA的表达量 显著 降低 。结果表明，不同副溶血弧菌分离株的m mRNA表达差异显著，临床分离株的m mRNA表达量总体上高于海产 品分离株，副溶血弧 菌在不同应激条件下主要表现为t dh mRNA表达上调 。 关键词：副溶血弧菌；荧光定量PCR；6挑基因；表达差异 中图分类号： 852．61 文献标识码：A 文章编号：0529- 5 130(2008) 09 ．O009 ．05 Di f f er ent i al expr e i on of t dh gene f r om t he di f f er ent Vi br i o par ahaemol yt i cu i ol at e a det er mi ned by r e al - t i me PCR WANG Shu- na ，FANG Wei - huan ’ ( I n t i t ut e of Pr event i ve Vet er i nary Medi ci ne of Zhej i ang Uni ver i t y and Zh oi an g Pr ov i nci a l Key Labor at ory of Pr event i ve Vet er i nary Med i ci n e ，Hangz hou3 10029，Chi n a) Ab t r act ：Real - t i me PCRme t hod wa u e d t O det ect t he expr e i on of t he t dh gen e i n m廊par ahaemol yt i cu i ol at e f r om di f fer ent or i gi n a nd under t r e condi t i on u i ng pl ， “gene a t he i n t ema l t an da r d ．The mel t i ng ca l v e anal y i of bot h pvuA a nd t dh ge ne i nd i cat ed t hat t he ampl i f i c at i on wer e pec i f i c ．Expr e i on of t dh gene f r om t he cl i ni cal 矿pa r ah aemol yt i cu i ol at e we r e ma r kedl y hi g her t h an t hat f r om t