荧光定量PCR法检测人乳腺珠蛋白与乳腺癌微小转移诊断的研究.pdfVIP

2008 N028 CHINA FOREIGN MEDICALTREATM ENT 基础研 究 荧光定量PCR法检测人乳腺珠蛋白与乳腺癌微 小转移诊断的研究 葛明广 (山东省临沂市第四人 民医院 山东临沂 276005) 摘【要1目的 克隆人乳~,Lffr白 )基因，建立荧光定量PCR方法，探讨外周血 MmRNA的表达作为乳腺癌血行微 小转移标志物的可能性。方法 设计特异引物，用RT—PCP．方法从乳腺癌组织扩增获得 目的片段，利用T／A克隆将 PCR产物插 入pMD一18T戴体 ，优化扩增条件 ，以pMD／M 质柱制备标准曲线，建立FQ—PCR方法，对乳腺癌不同分期的患者 (n=28)，乳腺良 性疾病患者 (n=15)，其他肿瘤患者 n(=33)的外周血进行检测。结果 成功获得hMaM基因并完成克隆，阳性克隆测序结果与预期 序列一致 ；建立 了SQ—PCR．检测hMaMmRNA方法；28例乳腺癌病人 中9例 (32．1哟 阳性 O期 4例，II期 3例，III期 1例 ，Ⅳ期 1 例)，hMaM mRNA的表达与乳腺癌病理分期无关 (x=O．5936；P0．05)；乳腺 良性疾病组，其他肿瘤病人组及对照组外周血 中均 未检 出hMaMmRNA。结论 hMaM mRNA是乳腺癌特异性标志物 ，其外周血的表达可作为乳腺癌血行微小转移的指标 。 【关键词】荧光定量PCR 乳腺珠蛋 白 乳腺癌 微小转移 【中图分类号】P．737．9 【文献标识码】A 【文章编号】1674一o742(2008)10(a)一0025～03 TheStudyofFQ—PCRforDeterminingMammaglobinmRNAandImplicationofr MonitoringMicrometastasisofPatientswithBreastCancer GEMingguang TheFourthPeoples‘HospitalofLin’yi，Shandong276005 A【bstract】Objective Toclonehumanmammaglobin (hMaM)geneandestablishamethodoffluorescencequantitativePCRfor determininghMaM mRNA，andinvestigatethepossibilityofhMAM mRNA asabiomarkerformonitoringmicrometasatsisofbreastcna cer inperipheralblood．MethodsTheinterestedsegmentwasobtainedbyreversetranscriptionPCR wiht thedesignedspecificprimers，nad insertedintopMD-18TvectorbyT／Amatch．FQ—PCRwasestbalishedafteroptimizingthesystemofPCRamplifieationnadthestandard CHIVeWaggeneratedbyseriesdilutionofpMD／M plasmidDNA templates．hMaM mRNA ofperipheralbloodmonocyteswasisolatedfrom patients，includingbreastcancergroup (n=28)，be