ELISA法检测黄曲霉毒素的关键控制点.pdfVIP

广东饲料 第 17卷第 11期 2008年 11月 ELISA法 检 测 黄 曲霉 毒 素 的关 键 控 制 点 陈 玲 (广东温氏食品集团有限公司生产技术部，新兴527439) [中图分类~18816．17 [文献标识码】C [文章编号】10o5—8613(2oo8)10一o035—02 目前黄曲霉毒素检测的主要方法有 ：薄层法 “O”。如果需要更多的样品，应在标记为 “x”的位 (TLC)、高效液相色谱法 (HPLC)、免疫亲和柱荧 点再次取样。 光光度法 、酶联免疫吸附法 (ELISA)、快速荧光 法。酶联免疫吸附分析法(ELISA)是测定饲料中黄 曲霉毒素含量的常用方法，所涉及的仪器及试剂比 较少，操作比较简单，被很多企事业单位所采用。但 在应用 ELISA法检测黄 曲霉毒素时如果不注重操 作细节问题，就可能出现假阳性 ，从而难以很好地 监控饲料品质。现将我在应用ELISA法检测黄曲霉 毒素过程中积累的经验体会总结如下： 图 1 取样方式 1 采样 2 制样 霉菌毒素广义上的检测，应该包括取样 、制样 在实际检测黄 曲霉毒素时的操作是将具有代 和分析三步。由于霉菌毒素的污染具有极不均匀 表性的饲料原料及配合饲料约 1kg粉碎 ，使至少 性分布而且在农产 品中的存在 是基 于 p“pb 75％的饲料样品能够通过20目筛网，混合均匀，用 (g／mg)”水平，最终样品的检测值是不能完全代 四分法进行二次取样 。 表最初货物的真正含量。在检测的取样 、制样和分 3 萃取 析三个步骤中都不可避免地存在着误差。其中，取 本实验萃取过程时样 品萃取液 的pH值为 样环节产生的误差最大，占总误差的85％以上，而 6～8，样品液的pH值过高或过低都会影响检测结 制样与分析两个环节共 占总误差的 15％以下。正 果。所以，检测前就需要调整好样品液的pH值。当 是因为这个原因，欧盟在98／53／EC指令中对花生 样品提取液的pH值低于5时，酶标抗原中的酶结 中黄曲霉毒素的取样、制样和检测，尤其是取样作 构发生不可逆的变化 ，并丢失其大部分活性 ，导致 了严格的规定，该指令规定 ：花生中黄曲霉毒素检 显色反应时颜色偏浅，结果出现假阳性。 测取样 以集装箱做批，每批抽取 100个点，每个点 4 合理稀释样品 300g样品，集合样品总重 30kg。30kg样品送至实 每种试剂盒都有它的检测限，如ROMER试剂 验室后 ，被均分为 3份 ，每份 10kg，全部粉碎后供 盒测定黄 曲霉总量的检测限是 l～20 kg。如果我 检测用，即每集装箱货物需检测 3个样品，方可判 们用ROMER试剂盒测定发现样品中黄曲霉毒素 断是否合格。所有这些规定，都是尽最大限度降低 的含量超过 20 g／kg，应需要扩大样品稀释倍数后 来 自取样、制样和检测的误差，使最终样品的检测 再重新做。根据经验，花生粕中的黄曲霉毒素总量 结果能具有一定的代表性。 一 般都是超过试剂盒的检测限的，所以当我们检测 针对用卡车或拖车装载的玉米，我们采取探 花生粕时，可以同时做两个稀释梯度 ，这样检测就 针对称式取样方式 ：第一次取样 的位点标记为 快捷很多。 5 加样 [收稿 日期]2008—09—27