饲料分析与检测实验：大豆制品中尿素酶活性的定量测定 免费.docVIP

实验六 大豆制品中尿素酶活性的定量测定 【学习目标】 掌握豆类饲料尿素酶活性的测定方法，并能用该方法检测豆类制品尿素酶活性。 一、操作方法 （一）方法一：尿素—苯酚磺肽染色法(美国大豆协会) 1.尿素一苯酚磺肽溶液 将1.2g磺肽溶解于30.0ml 0.2mol/L的氢氧化钠溶液中，用蒸馏水稀释至约300.0ml，加入90.0g尿素并溶解，用蒸馏水稀释至2000.0ml，加入1000.0ml 2.0mol/L硫酸(或70.0ml 0.4mol/L的硫酸)，用蒸馏水稀释至最后体积为3000.0ml。(尿素一苯酚磺肽试剂有效期仅90天)。 2.测定方法 （1）在一个150.0ml的烧杯中，倒入少量尿素一苯磺肽溶液，注意必须呈明亮琥珀色。若溶液已转变为深橘红色，滴加0.4mol/L的稀硫酸并搅拌，直至溶液再度出现琥珀色。 （2）把样品磨碎后，量一汤匙放人培养皿中，其量刚好铺满培养皿底部。 （3）在样品上加入两汤匙尿素—苯磺肽溶液，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中，若仍有干样品，则再加入溶液，直到将样品浸湿。 （4）放置5min后观察 ①如没有任何红点出现，则再放置25.0min，若仍无红点出现，说明豆粕过熟，营养损失严重，蛋白质质量下降。 ②如有少数红点，有少量尿素酶活性，产品可用。 ③豆粕表面约有25.0％为红点覆盖，有少量尿酶活性，豆粕可用。 ④豆粕表面约有50.0％为红点覆盖，有尿素酶活性。 ⑤豆粕表面的75.0％～100.0％为红点覆盖，尿素酶活性很高，说明此产品加热不够，不可接受这种原料。 对尿素酶过度者(低于接收标准的)，有条件可做蛋白质溶解度试验。 （二）方法二：酚红—指示剂变色法 1.原理 酚红指示剂在pH6.4～8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解，产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红时间长短来判断尿素酶活性大小。 2.测定步骤 将试样研细，称取0.02g，称准至0.01g，转入试管中，加入0.02g结晶尿素及2滴酚红指示剂，加20.0～30.0ml蒸馏水，摇动10.0秒钟。观察溶液颜色，并记下呈粉红色的时间。 3.尿素酶活性的测定结果表示 (1)1.0min内呈粉红色为活性很强。 (2)1.0～5.0min内呈粉红色为活性强。 (3)5.0～15.0min内呈粉红色为有点活性。 (4)15.0～30.0min内呈粉红色为没有活性。 通常10.0min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为合格。 二、检验方法评述 根据所提供的条件，测定某一大豆制品中尿素酶的活性；根据所提供的条件，能配制检测的各种溶液；熟练掌握两种快速检测法。 大豆制品的副产品大豆粕，是我国最常用的一种植物性蛋白质饲料，但生大豆饼粕尚含有抗营养物质（如抗胰蛋白酶、甲状腺肿因子、皂素、凝集素），它们影响豆类饼粕的营养价值，使用时应加以注意。