重组抗LMP1单链抗体／鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达.pdfVIP

第26卷第l期 广 东 医 学 院 学 报 Vo1．26 No．1 2008年2月 JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE Feb．2008 重组抗LMP1单链抗体／鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达 黄秀兰 2，唐旭东 ，熊 亮。，周克元 (广东医学院1．附属医院儿科研究室；2．生物化学与分子生物学 研究所，广东湛江524023；3．赣南医学院预防医学系，江西赣州341000) 摘 要：目的 体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白l单链抗体(LMP1 scFv)／截断的鱼精蛋白截短体(truncated pmtamine，tP)融合基因，将其克隆至原核表达载体pET32a，并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv／tP融合蛋白。方法 设 计融合基因LMP1 scFv／tP，在LMP1 scFv／tP的5’和3’端设计EcOR I和Hind HI酶切位点；在DNAWORKS程序指导下 设计成22个相互互补的寡核苷酸序列，经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv／tP，再将目的基因片段亚克隆至pMD 18一 Tsimpl 载体中，经过酶切鉴定和测序验证。进一步将目的基因片段克隆至原核表达载体pgT32a，在大肠杆菌中诱导表达 融合蛋白并经 SDS和western blot验证。结果 各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带，将获得的 LMP1 scF、，／tP融合基因构建至原核表达载体pET32a，经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。结论 成功获得LMP1 scFv／ tp融合基因，并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv／tP融合蛋白，为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定 基础。 关键词：LMP1 scFv／tP；基因拼装；表达；融合蛋白 中图分类号：R 318．34 文献标识码：A 文章编号：1005—4057(2008)01—0001—05 Construction and expression of the recombinant anti-LMP1 scFv／tP fusion protein HUANG Xiu 1an ，一，TANG Xu—donga XIONG Liang3，ZHOU Ke yuan2(1 ， ． Latx)ratory of Pediatrics，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College；2．Institute of Biochemistry and Molecular Biology，Guangdong Medical College，Zhanjiang 524023，China； 3．Department of Preventive Medicine，Gannan Medical College，Ganzhou 341000，China) Abstract：Objective To aasembe the fusion gene anti—EBV LMPl scFv／tP in vitro and construct and express this fusion gene in an expre_~sion vector．Methods The fusion gene LMP1 8CFv／tP was erected all EcoR I at the 5’end and a H ， III at the 3’end．Based on the sequence of LMPl scFv／tP，a pair of 22 nucleotide primers that complement each other were designed by following the instruction Of the DNAW0RKS program．The target gene fragment of LMP1 scF ／tP was obtained by PCR． and then