水稻OsHsfB2b基因性能初步分析和OsbZIP74基因之载体建设及遗传转变.docVIP

　　水稻OsHsfB2b基因性能初步分析和OsbZIP74基因之载体建设及遗传转变 第一章绪论 1 热激转录因子（Hsf)研究进展 大约在4亿年前，空气中游离氧的浓度满足了植物陆上生活的条件，陆生植物幵始出现。作为固着生物，植物不得不形成特定的生长和繁殖体系来应对水分不足、高盐、高温、低温和重金属等多种胁迫环境。全球气候变化下，一个内在的细胞应激反应调控系统对植物的生存是必需的。近50年的分子细胞生物分析学研究揭示了细胞应激反应调控系统的中心环节，即保持蛋白质合成、折叠、细胞内定位、功能作用和降解等过程的平衡。热激诱导表达和组成型表达的热激蛋白（Heat stress proteins，Hsps)家族成员在维持和恢复蛋白质平衡过程中有重要作用。变性蛋白的加工和新蛋白合成的过程会减少自由分子伴侶的数量，产生细胞质蛋白的胁迫。这种胁迫会激活Hsp编码基因在热激转录因子（Heatshock transcription factors, Hsfs)调控下的转录。Hsfs是高等植物在应答热胁迫过程中的中心调控因子，在信号传导和耐热性方面有重要的作用。 1.1Hsfs的分子结构 Hsfs包含一个模块化结构，尽管在大小和序列上差异很大，但其基本的结构和启动子识别机制是非常保守的高度结构化的DNA结合域（DNA-binding domain, DBD)位于所有Hsfs的N末端。通过晶体结构分析和核磁共振等手段对果姆、酵母和植物中Hsfs进行分析发现，DBD呈疏水的球形状，由3个a -螺旋（HI，H2和H3)和4条时斤叠（￠1-0 2-0 3-0 4)组成。其疏水中心保证了螺旋-转角-螺旋基序（H2-T-H3)与热激启动子元件（Heat shock element, HSE)的回文序列（5-AGAAnnTTCT-3）特异性结合。结合过程通常需要两个以上的HSE，且HSE的结构和启动子的上下游序列对Hsf寡聚物的结合是至关重要的[12]。此外，也有不依赖于HSE的Hsfs存在。植物中，拟南芥AtHsfAla与胁迫响应元件结合在依赖Hsf的相关基因的表达中有重大作用。在持家基因的启动子中，Hsfs可能通过与邻近的其他转录因子结合形成增强子复合物。 寡聚域（OUgomerization domain, OD)通过15-80个可变长度的氨基酸残基序列与DBD连接。它以亮氧酸拉链为特征，是HR-A/B (Heptad repeats-A/B)形成的a卷曲螺旋。由于0D的差异，Hsfs被分为：A、B和C三类。3类Hsfs在HR-A/B之间插入氨基酸数目分别是21，0和7。核定位信号（Nuclear location signal, NLS)是由OD结构域C端的碱性氨基酸残基组成。在B类Hsfs中，碱性氨基酸簇与高度保守的抑制四肽基序-LFGV-相连，可能作为NLS起作用。根据细胞核输出与输入的平衡，细胞内Hsfs在核、质中的分配变动极大。其C末端一段疏水的富含亮氨酸序列，作为核输出信号（Nuclear export signal,NES)负责介导核输出过程。C 末端激活域（C-Terminal Activator Domain, CTAD)包含 AHA (Aromatic,Hydrophobic and Acidic amino acids)基序，其大小和序列最不保守，主要负责激活Hsfs的转录。AHA基序包括一些芳香的、大的疏水的和酸性氨基酸。A类Hsfs作为转录激活子的功能是由短肽AHA基序介导的。HsfA8作为A类Hsfs的一个特例，其C末端缺少基序，相应地，HsfA8在酵母单杂交中没有激活特性。 1.2Hsfs活性的调节 Hsfs活性的调节主要反映在其对热激的响应过程。针对热激条件下，Hsfs与HSE的相互识别和结合的过程，以Hahn等提出的番前Hsf调控模型（图1.1)进行说明。正常条件下，HsfAla与Hsp70/Hsp90结合而无活性；Hsffil通过降解而维持较低的表达水平，其降解过程可被GDA (Geldanamycine)或蛋白酶体抑制子PSI所抑制。热激条件下，HsfAla从三元复合物中释放，并与HsfBl形成转录复合体，募集HAC/CBP组氨酸乙酰转移酶到转录机器上，然后协同作用激活热激诱导基因（包括Hsp70，Hsp90, Hspl7和HsfA2等的编码基因）的表达。持续热激下，分子伴侶和HsfA2大量积累。HsfA2与HsfAl形成低聚物，是具有超强激活活性的复合体。同时，部分新合成的HsfA2和分子伴伯组装成高分子量的热胁迫颗粒（Heat stress granules, HSG)。在恢复阶段，Hsp70与HsfAl结合，使其活性消失；Hsffil与Hsp90结合，Hsffil被降解。此外，Hsffil与转录因子TX结合恢复看