复方疮疡搽剂中没食子酸含量测定.doc

复方疮疡搽剂中没食子酸含量测定（河南省医药学校，河南 开封 475001）?? 摘 要：目的：建立复方疮疡搽剂中没食子酸的含量测定方法。方法：采用HPLC,Kromasil C18色谱柱,流动相甲醇-0.025%磷酸水溶液(4∶96),柱温；25℃，流速1mL/min,检测波长275nm。结果：相关系数r=0.99972,精密度RSD为0.42%，平均加样回收率为99.1%，RSD为0.91%，结果示线性关系良好。结论：该方法操作简单,分离效果好,可用于复方疮疡搽剂的质量控制。关键词：复方疮疡搽剂；没食子酸；高效液相色谱法? 中图分类号：R927.2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0040-02? 复方疮疡搽剂由金银花、大黄、五倍子、柯子、当归、黄柏、乌梅等组成。具有清热解毒、敛疮止血、抗菌消炎的功效。主要用于治疗各种溃疡、外伤出血、痈、肿、疔、疖等症。方中五倍子、柯子、乌梅具有收敛止血、抗菌消炎之功效,其主要成分为没食子酸，为疮疡搽剂中的有效成分之一。本实验对样品预处理后，用甲醇回流提取，采用HPLC 法对疮疡搽剂中的没食子酸进行含量测定,以对其质量进行控制。本法取样量少，操作简便，精密度高，分离良好。? 1 仪器和试药? 1.1 仪器? Agilent 1100 高效液相色谱仪; KromasilC18色谱柱;G1315B DAD检测器；自动进样器；四元泵；Agilent 1100 化学工作站。? 1.2 试药? 没食子酸对照品(0831-9501):中国药品生物制品鉴定所;样品:自制(批号:000213，000214，000215，000216，000217) ；甲醇：色谱纯（天津市四友生物医学技术有限公司）；磷酸：分析纯（广东汕头西陇化工厂）；所有色谱用试剂均用0.45μm微孔滤膜过滤；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。? 2 方法与结果? 2.1 色谱条件? 色谱柱 KromasilC18 250×4.6mm 5μm;流动相: 甲醇-0.025%磷酸水溶液(4∶96) [1] ;流速1mL/min ;检测波长275 nm；柱温：25℃；进样量:1μL；分析方法:外标法。? 2.2 检测波长的选择? 取没食子酸对照品适量,用流动相溶解并稀释,于200～400nm 处进行UV 扫描,从其紫外图谱中可见其在220nm、275 nm 处有最大吸收,但在220nm检测波长下，流动相中甲醇及样品中其他物质的紫外吸收干扰较大，基线不稳，故选择275 nm 为检测波长。? 2.3 系统适应性试验? 分别按照2.5、2.6项下方法制备对照品溶液及供试品溶液，按2.1项下色谱条件，各进样5μm，同时采集200~400nm光谱数据，结果显示，供试品溶液相应色谱峰的光谱与对照品没食子酸一致，并经Agilent 1100 化学工作站纯度分析，色谱峰纯度符合规定。没食子酸对照品保留时间为10.7min，理论塔板数大于3 000。故将最小理论塔板数定为不低于3 000 。2.4 流动相的选择? 文献报道没食子酸的测定方法很多，主要以薄层扫描法和高效液相色谱法[2、3]为主。参考文献报道的方法试验，流动相用甲醇-水（5∶95）,水-乙酸（98∶2），甲醇-冰醋酸-N，N二甲基酰胺-水（1∶3∶15∶81）[4]，甲醇-0.5%冰醋酸（15∶85），在该制剂中没食子酸的分离效果均不佳，初步选择甲醇-0.025%磷酸水溶液（30∶70）作流动相，没食子酸与其他组分色谱峰分离虽然较前几种流动相效果好，但仍不佳，考虑到没食子酸显酸性，故流动相的pH值对没食子酸的分离影响较大[5]，通过不断改变甲醇与磷酸水溶液的比例及流速，选定甲醇-0.025%磷酸水溶液(4∶96)及流速1mL/min比较合适，分离度好且保留时间适宜，而且在不断调节pH值的过程中证明流动相的pH值确实对没食子酸的分离影响较大。? 2.5 对照品溶液的配制? 精密称取减压干燥至恒重的没食子酸对照品,加甲醇制成0. 108mg/mL的溶液,作为对照品溶液。供试品溶液的配制精密吸取样品(批号:000213)10mL，水浴蒸干加甲醇10mL超声处理300min，滤过,甲醇定容于10mL容量瓶中,摇匀即得。? 2.6 供试品溶液的配制? 精密吸取样品(批号:000213) 10mL，用1mol/L NaOH调pH值至7，过滤，滤液用氯仿萃取3次，每次10mL;弃去氯仿液，水液用稀盐酸调pH值至3，过滤，滤液水浴蒸干；40mL甲醇回流30min,放冷，滤过，回收甲醇，定容于10mL容量瓶中，以0.45μm微孔滤膜滤过，备用。? 2.7 线性关系考