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白花蛇舌草LC-MS指纹图谱探究[摘要]目的：建立白花蛇舌草的LC-MS指纹图谱。方法：采用LC-MS法，检测不同产地同一季节采收的10批样品色谱特征，与此同时和黄毛耳草（两者都属于茜草科耳草属植物）进行比较。结果：建立白花蛇舌草指纹图谱。结论：LC-MS指纹图谱具有特异性，可以评价和全面控制白花蛇舌草质量。 [关键词]白花蛇舌草；LC-MS；指纹图谱 [中图分类号]R927[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2007）02（b）-021-03 白花蛇舌草为茜草科一年生草本植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.)的带根全草，始载于《广西中药志》。具有清热解毒，利湿通淋之功效。临床上用于治疗扁桃体炎、咽喉炎、急慢性胆囊炎、尿路感染、菌痢、毒蛇咬伤、癌症等有显著的疗效[1,2]。 齐墩果酸、熊果酸和阿魏酸是白花蛇舌草的重要活性成分，前二者为同分异构体。具有抑菌、护肝、升白细胞 [3,4]等作用。阿魏酸具有抗氧化[5]和清除自由基、防癌等作用。然而，由于许多原因（如地理环境、培植、炮制方法等）会影响其化学成分、含量及临床疗效，因此，建立白花蛇舌草质控方法是非常必要的。我们采用LC-MS法，优化色谱质谱条件，检测不同产地样品的三种有机酸的含量，建立了白花蛇舌草的指纹图谱。 1 材 １材料与方法 2.1 仪器材料 LCMS-2010型液相色谱质谱联用仪（日本岛津），LC-10AD型双泵液相色谱，SPD-M10AVP型DAD检测器，7725i手动进样器，LCMS Solutions工作站。C18 （150×2.1 mm, 5 μm ）色谱柱 (美国Thermo Electron 公司)。流动相：甲醇-0.05%醋酸（表1）。流速：0.2 ml/min。柱温：45℃。注入量：5 μl。质谱APCI 400℃, CDL 250℃, BLOCK 250℃，正离子，扫描范围m/z 100～800。 2.2 试药和试剂 齐墩果酸对照品购自天津尖峰天然产物研发有限公司; 熊果酸对照品购自中国药品生物制品检定所，编号110742－200314;阿魏酸对照品购自中国药品生物制品检定所，编号0773－9910。纯度大于98%。 甲醇、乙腈为色谱纯购自美国Tedia公司，其他化学试剂如醋酸、乙醇均为分析纯。 2.3 药材 10批新鲜白花蛇舌草来自于同年9月的不同地区（表1）。它们均是白花蛇舌草带根全草。由湖南省中医药研究所彭荣贵研究员鉴定。将不同产地的样品60℃鼓风干燥2 h，粉碎研细并过40目筛，4℃贮存。 表1样品信息 1.4 对照品溶液制备 精密称取齐墩果酸、熊果酸、阿魏酸对照品适量 ,分别置于100 ml容量瓶中，甲醇溶解，定容至100 ml，摇匀，制成浓度分别为53 μg/ml、54 μg/ml及306 μg/ml的对照品贮备液，置于4℃保存备用。 1.5 供试品溶液制备 取样品粉末1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中加入甲醇40 ml，超声处理30 min，冷却，用甲醇补足失重，摇匀，静置，3000 r/min离心，15 min，取上清液用0.45 um的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。 黄毛耳草溶液制备方法同上。 2 结果 2.1 流动相选择 对不同流动相进行比较如甲醇-水，甲醇-乙腈-水，乙腈-水。结果发现甲醇-0.05%醋酸最合适，齐墩果酸和熊果酸这两个同分异构体被分离。而用甲醇-水流动相这两个有机酸不能被分离。用甲醇-乙腈-水为流动相阿魏酸峰不理想。因此通过多次试验选择甲醇-0.05%醋酸作为流动相，65 min后无特征峰出现，故检测时间为65 min。梯度洗脱见表2。 2.2 方法学考察 2.2.1 精密度取同一批样品5 μl注入HPLC，连续进样5次，以熊果酸峰的保留时间和峰面积值为1，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积及其RSD值，共有峰相对保留时间RSD小于3%，相对峰面积RSD小于5%。同一批样品每天在同一时间进样，连续进样5 d，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积及其RSD值。共有峰相对保留时间RSD小于2%和相对峰面积RSD小于5%。结果显示良好日内、日间精密度。 2.2.2 稳定性取同上批号的样品5 μl，分别在0，6，12，18，24小时进样，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积及其RSD值。相对保留时间小于4%和相对峰面积小于5%。结果显示样品溶液24 h内稳定。 2.2.3 重复性取同上批号的供试品5份，分别进样，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积及其RSD值。相对保留时间小于3%和相对峰面积小于5%。结果显示重复性好。