农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化研究.pdfVIP

第27卷 第1期 大 豆 科 学 voL 27 N o．1 2008年 2月 SOYBEAN SCIENCE Feb． 20o8 农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化研究 姬月梅’ ，陈受宜 ，李英慧 ，张丽娟 ，宋晓华 ，常汝镇 ，邱丽娟 ( 宁夏大学农学院，宁夏银川750021； 中国农业科学院作物科学研究所／农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程／农业部作物种质资 源与生物技术重点开放实验室，北京100081； 中国科学院遗传与发育生物学研究所，国家重点实验室植物基因组学，北京100101) 摘 要：以大豆品种“中豆32、Peking、早熟18、绥农14”子叶节为受体材料，用农杆菌介导法转入与抗逆相关的小 麦Na’／H 逆向转运蛋白基因(TaNHX2)，探索外植体大小、培养基主要成分、培养时间等因素对外植体分化的影 响，旨在优化遗传转化条件，提高大豆转基因的遗传转化效率。研究结果表明，以健康外植体获得率、抗性丛生芽 获得率和抗性芽伸长比率为指标，筛选并建立的优化转化系统为：大豆萌发和不定芽诱导时分别加入0．5 mg L～6一 BA和1．0 mg L～6．BA，浸染时间为30 rain、共培养时间为3 d；外植体大小为2／3子叶，kan抗性筛选浓度第一阶段 和第二阶段分别是60和50 mg L～；利用上述方法，已获得中豆32转基因再生植株，经PCR分子检测，证明目的基 因TaNHX2已导人并整合到大豆基因组中，转化率为3．78％。 关键词：大豆；遗传转化；子叶节；Na+／H+逆向转运蛋白；再生 Optimization of Genetic Transformation System from Soybean Cotyledon Media· ted by Agrobacterium jI Yue—mei ，CHEN Shou．yi。，LI Ying—hui ，ZHANG Li—juan ，SONG Xiao—hua ，CHANG Ru—zhen ，and QIU Li一 - 2 juan ( Ningxia University Agricultural College，Yinchuan 750021，Ningxia； The National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement (NFCRI)／Key Laboratory of Germplasm＆Biotechnology(MOA)，Institute of Crop Sciences，Chinese Academy of A cultural Sciences，100081 Bei— ring； The National Key Lab of Plant Genomics，Institute of Genetics and Developmental Biology，Chinese Academy of Sciences，Beijing 100101，China) Abstract：Transgenic soybeans have been widely planted aboard，which leading the development of the transgenic crop in the world．Establishment of an efficient genetic transformation technology system will facilitate physiological and molecular biology studies as well as the improvement of cultivars in China．The objective of this study was to optimize the conditions of the cotyledon node system of Agrobactefium··mediated soybean transformation so th