电融合技术进展及其在干细胞研究中的应用.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（７）：８０８５ ? 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 综　　述殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪 电融合技术进展及其在干细胞研究中的应用 １ ２ １ 屈　娅 　徐海伟 　阴正勤 （１重庆第三军医大学西南医院　重庆　４０００３８　２重庆第三军医大学基础部　重庆　４０００３８） 摘要　电融合作为细胞融合的技术之一，在单克隆抗体制备、基因转移、抗肿瘤免疫等研究中占据了 重要作用。目前电融合技术已经被广泛应用于发育生物学，以阐明胚胎发育过程并培养优良的品 系。电融合技术结合体细胞核移植技术和体细胞重编程等技术可建立符合伦理学原则、避免排斥反 应的个体化多能干细胞。就电融合技术在发育生物学和干细胞研究中的应用作一综述。 关键词　电融合　嵌合体　体细胞核移植　核重编程　多能干细胞 中图分类号　Ｑ８１３ 　　细胞融合（ｃｅｌｌｆｕｓｉｏｎ）是２０世纪６０年代发展起来 用［２］。１９７８年，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ创立了一种全新的细胞融 的一项细胞工程技术，也称细胞杂交，是指两个或两个 合技术———电融合，Ｓｅｎｄａ于 １９７９年首先应用电脉冲 ［３］ ［４］ 以上的细胞通过生物、化学或物理学方法融合在一起， 诱导植物细胞融合 ，随后Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ等 又将细胞 产生出兼备亲本遗传性状的杂合细胞。融合后的细胞 电介质 电泳 引入 以诱 导 细胞 间接触，创立 了 ［５］ ［６］ 获得来自两个亲本细胞的遗传物质，具有新的遗传或 Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ电融合法，Ｎｅｕｍａｎｎ 和Ｗｏｎｇ 也在１９８２ 生物学特性，经过培养可以用于制备细胞工程产品，甚 年实现了细胞电穿孔转移基因，开拓了电融合在基因 至产生特别的物种或者品系。作为一项迅速发展的新 转移领域的运用，此后电融合技术在生物工程技术方 ［７９］ 兴细胞工程方法，细胞融合技术已成为细胞工程研究 面的发展日新月异 。 的重要内容之一。 　　目前的电融合仪一般采用低压交流电促进细胞排 　　细胞融合方法主要包括电融合、化学融合和病毒 列和接触后，施加高压直流脉冲诱导细胞融合。在短 介导的融合方法。１９５７年，冈田善雄发现利用灭活的 时间强电场的作用下，两个相互靠近细胞的胞膜发生 仙台病毒（ＨｅｍｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇｖｉｒｕｓｏｆＪａｐａｎ，ＨｖＪ）可以 可逆性电击穿（ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅｂｒｅａｋｄｏｗｎ），瞬时失去其高电 引起艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞，从而为利用病 阻和低通透特性，在数分钟后恢复原状，细胞可通过细 毒为诱导物进行细胞融合奠定了基础。随着研究的深 胞膜接触区的融合而形成一个大的细胞。与传统的病 入，病毒具有的生物危害性等缺点逐渐被认识，不适合 毒融合法和ＰＥＧ融合法相比，电融合具有以下特点： 临床运用。１９７４年，高国楠利用聚乙二醇（ＰＥＧ）促使 （１）电融合的强度和时间较其它化学及生物融合法容 易控制；（ 了植物原生质体的融合，因ＰＥＧ诱导方法具有简单、快 ２）电融合中的电脉冲刺激是纯物理刺激，没