基于Fe3O4@SiO2Ni-NTA磁性微球的His-tag融合蛋白纯化体系的建立.pdfVIP

No.2 Vol. 33 高等学校化学学报 CHEM1CAL JOURNAL OF CHINESE VNIVERSπlES 303 句 307 2012 年2 月 基于 Fe 0 @ Si0 /Ni-NTA 磁性微球的 2 4 3 His-tag 融合蛋白纯化体系的建立 王文加1 ，郭晓林2 ，韦安慧1 ，付常蜡1 ，韩振国3 (1.吉林大学药学院， 2. 吉林大学第一医院，长春 13∞21; 3. 吉林大学中日联谊医院，长春 13∞3 1) 摘要 合成了表面共价结合 Ni-氨基三乙酸(Ni-NTA) 基团的 Fe 0 @Si0 微球，这种磁性微球可用于分离含 3 4 2 His-tag 标签的融合蛋白，微球中心由尺寸约甜2 nm 的 Fe)04 微粒组成，赋予了微球极好的磁性分离和离 有 心分离的特性.应用 Fe)04@Si0 /Ni-NTA 磁性微球对含有6xHis-tag( 6 聚组氨酸)标签的蛋白进行了分离纯 2 化，结果表明. 10 mg Fe)04@Si0 /Ni-NTA 微球能够从 IO mL重组蛋白裂解液中纯化出约 1 mg 带有 6xHis­ 2 ta在标签的融合蛋白.微球的高效分离效果使其能够用于含量较低的带有6xHis-tag 标签蛋白的分离纯化. 关键词 磁性微球; 6xHis-tag 蛋白:亲和纯化; N卜氨基三乙酸 中图分类号 0629 文献标识码 A DOl: 10. 3969/j. issn. 0251 -0790. 2012. 02. 016 利用重组蛋白表达方法获得具有正确折叠的可洛活性蛋白的技术己被广泛用于制药、疫苗和基础 科学研究等领域.重组蛋白的分离和纯化方法主要有分子筛色谱、离子交换色谱和亲和层析色谱等3 种方法.其中，亲和层析色谱法是目前应用最广泛的蛋白分离纯化方法.采用亲和层析法分离纯化目 的蛋白需把要表达的目的蛋白的基因序列通过基因克隆的方法插入到质粒中或整合到基因组中，从而 在宿主菌或细胞中大量表达目的蛋白:为了分离和纯化所表达的目的蛋白，通常在目的蛋白序列的 N 端或C 端插入亲和纯化标签的核酸序列;这些融合了亲和标签的重组蛋白能够方便、迅速地被分离和 纯化.目前，比较常用的亲和标签有谷光甘肤转移酶(GST) 和 6 xHis-tag ( 6 聚组氨酸)等，其中 6xHis­ tag 标签能够特异性地被金属整合物识别.由于金属整合物和 His-tag( 多聚组氨酸)标签蛋白的这种特 异性吸附作用，固定金属离子亲和色谱法(IMAC) 就应运而生. Porath 等[1-4J 奠定和发展了应用 IMAC 分离和纯化蛋白的技术. Hochuli 等[5J 首次用基因克隆重组技术在目的蛋白的 N 端或 C 端加入连续的 His-taε 标签，并用 IMAC 技术对融合有 His-tag 标签的蛋白进行分离纯化.目前，已开发了许多商品化 的基于 Ni-氨基三乙酸(NTA)纯化介质的 His-tag 融合蛋白纯化试剂盒，如 Promega 公司的基于 Ni-NTA 磁性微球的亲和纯化试剂盒及Qiagen 公司的基于Sepharose @ CL-6B 的 Ni-NTA 亲和纯化柱等，这种基 于琼脂糖凝胶的 Ni-NTA 亲和纯化填料