ERG基因及BAALC基因在正常核型急性髓系白血病中的表达及临床意义.pdfVIP

目 录 一、摘要 三、论文 综述…………………………………………………………………………… 在学期间科研成绩………………………………………… 致{射…………………………………………………………………………… 个人简介…………………………………………………………………………·40 ·中文论著摘要· ERG基因和BAALC基因在正常核型急性髓系 白血病中的表达及临床意义 目 的 白血病是一组基因组发生动态变化的异质性造血干／祖细胞疾病，以异常造血 细胞的恶性增殖、分化受阻、凋亡受抑制并造成正常血细胞减少为特征。大约45％ 的急性髓系白血病患者在常规染色体核型分析时检测不到染色体畸变，为正常核 型，但这种亚型的患者在分子遗传变异和治疗效果上存在异质性。亚显微上的遗 传学损伤不仅与疾病的发病机制有关，还影响其治疗反应性和生存率。在正常核 型急性髓系白血病(CN．AML)中常见的分子畸变有核磷蛋白(NPM)基因突变 患者中也发现其他分子异常，包括预示良好预后的CEBPA(CCAAT／增强子结合蛋 白00基因突变以及MLL基因部分串联重复(MLL．PTDs)。 平定量上的差别，为CN．AML的预后提供了重要的信息。然而，这些危险因素间 的相互关系和相对重要性研究还较为少见。本文我们利用荧光定量PCR技术联合 检测一组具有典型特征的CN．AML患者ERG基因和BAALC基因的转录水平， 从而探讨不同分子标记与预后的关系以及他们之间的相互关系，为这部分患者进 一步精细分型进而分层治疗提供新的理论依据。 方法 一、实验材料 收集中国医科大学附属盛京医院血液病治疗中心2008年1月．2009年1月住 例，女32例，年龄在20．77岁之间，中位年龄54．5岁。所有病例经细胞形态学、 细胞化学染色、流式细胞术免疫分型及PCR融合基因检测确诊为AML(FAB)，染 色体分析采用R显带技术，至少分析20个克隆，均未检测到核型异常。其中包 患者作为正常对照。实验组患者接受诱导缓解方案或强烈化疗方案。 二、实验方法 采用实时定量RT-PCRSYBRGreenI方法检测ERG和BAALCmRNA表达水平， 以GAPDH作为内参照。 三、结果判断 将标准品eDNAl0倍浓度梯度稀释为5-6个浓度梯度，各取2山作为模板进 Time 行Real PCR反应，由各扩增曲线得到的Ct值制作标准曲线，从而得到样本 因和内参基因拷贝数的比值进行样本间相对定量的比较。 四、统计学分析方法 应用SPSSl3．0版统计软件进行数据分析，分别以患者ERG基因相对表达量 第75百分位数(P75)和BAALC基因相对表达量中位数为界，分为高表达和低表达 U 2组，对于分类变量资料应用#检验，对于连续变量资料应用Mann-Whimey 检验进行统计学分析，应用Kaplan．Meier生存曲线进行生存分析，相互比较使用 Log．rank检验，P0．05为差异有统计学意义。 结 果 1、方法的可靠性和准确性 (1)RNA的纯度和质量分析 琼脂糖凝胶电泳鉴定，28S和18S条带清晰可见，说明总RNA无明显降解。 (2)扩增的特异性及定量的准确性 标准品eDNA经梯度稀释后进行PCR反应，制作标准曲线。得到的标准曲线 相关系数(12)均0．998，斜率在．3．3至．3．5之间，反映定量准确，扩增效率良好。 2 (1)ERG基因高表达组患者白细胞计数增高俨如．05)，骨髓原始细胞比例较高 俨如．05)，FAB分型中M0／M1比例偏高。 妒o．05)，FAB分型中M0／M1比例偏高。 4、ERG和BAALC基因与正常核型急性髓系白血病预后的关系 74％； ERG和BAALC基因高表达组患者CR率显著低于低表达组(40％VS P0．05，46％vs