脓毒症大鼠心肌损害及TLR4NF-kB信号通路变化关系的研究.pdfVIP

．脓毒症大鼠心肌损害与TLR4／NF．kB信号 通路变化关系的研究 硕士生姓名： 刘鹏程 孑旨导教师： 曲 鹏 教授 指导小组： 曲 鹏 教授 专业名称： 老年医学 摘 要 目的：现阶段脓毒症广泛存在，对患者危害极大，耗费大量医疗资 源，而目前治疗缺乏特异手段，需要进一步扩展对策，同时重症脓毒症 及脓毒症休克常伴发SIRS及MODS，心脏功能受损首当其冲。目前脓毒 症治疗普遍采用全身抗生素合并局部感染灶清除术，如并发脓毒症后心 功能不全，多为对症处理，效果欠佳，尚无特效药出现。脓毒症后心肌 功能不全(脓毒症心肌病)机制尚未完全阐明，但一致认为与人体过度 激活的自身免疫反应相关。围绕脓毒症后心肌局部及全身炎症反应通路 的研究很多，但这些通路亦在机体|下常免疫反应中相互交织，维系重要 作用，目前研究水平尚难以精确区分生理及病理时各因子所发挥作用， 强行对炎症通路进行调控最终结果如何尚需进一 步研究，指导临床尚 未成熟。本实验旨在明确腹腔注射LPS所致脓毒症模型中的Toll样受体 坏死因子a，N末端前体脑纳肽及心功能的变化情况，为指导I艋床用药 提供初步理论依据。 方法： 1．脓毒症大鼠心肌模型的建立：采用腹腔注射脂多糖(LPS)方法制 作大鼠脓毒症心肌模型，腹腔注射LPSlomg／Kg体重，使用无菌盐水配 分组，其中对照组lO只，LPS24h组及LPS72h组各10只。分别于注射 药物后24h及72h处死实验鼠大鼠，同期处死对照组大鼠各5只。 能生理记录仪测定平均血压(MAP)、左室收缩术期压力(LVESP)、左 室压力上升及下降最大变化速率(士dp／dtmax)等心功能指标。 3．处死大鼠，留取心肌组织，HE染色观测各组心肌细胞变化情况； 分别提取心肌组织RNA及胞浆、胞核蛋白，RT—PCR及WesternBlot法 测定TLR4表达，WesternBlot法测定NF．kB蛋白的表达，ELISA法检 测各组大鼠心肌TNF．a及血清中NT-proBNP含量。 结果： l 1．腹腔注射LPS 0mg／K924h后，大鼠出现倦怠懒动，体毛竖立，粪 便稀烂，口鼻周及眼轮出血征象，解剖可见体内脏器多发充血糜烂； LPS72h组大鼠上述症状均明显好转或消失。 ．dp／dtmax均显著降低，至72h恢复正常水平。(表1，P0．05)。 3．光镜下，对照组大鼠心肌着色均匀完整，未见炎性细胞浸润。 LPS24h组心肌损伤明显加重。72h组心肌损伤减轻(图1HE染色x400)。 72h后渐恢复正常，与对照组无统计学差异。 5．与对照组相比，LPS24h组心肌组织TLR4及NF．KB p65蛋白显著 升高(p0．05)，而LPS72h组心肌组织TLR4及NF．1cBp65蛋白表达较 对照组无统计学差异。 也明显下降，但仍高于对照组，提示仍有后续心肌损伤(P0．05) 结论： 1．腹腔注射LPS(10mg／Kg)可以诱发产生脓毒症模型，可造成明显心 肌及功能损害。 2．模型中大鼠心肌TLR4／NF．kB通路过度激活，参与脓毒症大鼠模型 心肌细胞和功能的损害。 NF．kB 关键词：脓毒症TLR4 NT-proBNP 2 The betweenthe of and relationship damagemyocardial theTLR4／NF—kB inthe rat sepsis signalpathway