亚牛磺酸、透明质酸酶对马鹿精子体外获能影响地.pdfVIP

1绪论 和顶体反应。精子进入雌性生殖道或在体外培养时，由于精子表面电荷的改变和一些酶 的分解作用，使DF脱落或活性改变，从而解除了抑制，精子获能。因此，目前认为精 子获能的机理在于去除精子表面的DF或使DF失活。 从精子获能的机理看，获能主要有三方面的作用：从精子表面除去对某些蛋白酶的 抑制和去获能的化学因子，这些因子存在于精浆中，在射精前这些因子被覆在精子细胞 膜上，除去以后才能使顶体中的酶激活，从而发生AR。精子的顶体外膜通透比增强可 释放一种水解酶，以利精子钻入卵子内。这些水解酶除透明质酸酶外，还有与胰蛋白酶 化学性质相似的顶体素酶，使获能的精子有较高的受精力。精子在获能的过程中，精子 顶体膜要发生一些变化，其中包括精子膜的融合和与精子膜的脂构架有关的螺旋形蛋白 分子的形成和排列；融合的膜上出现许多液管状的小孔，提高精子膜的通透性，使精子 穿过ZP时蛋白质溶解酶从小孔中透出，作用于ZP，与卵子受精后而形成新的细胞合 子。 早期的获能研究，采用体内获能的方法，即从交配母畜的子宫内冲取出精子用于受 精，以受精率为指标，分析获能的部位、时程及其机制1191。精子在成熟过程中，表面被 覆了蛋白质类和多胺类，这些物质的存在对获能具有抑制作用。雌性生殖管道内的肝 素，可加速精胺从精子表面清除。在体内获能时，精子在雌性生殖道中的运动，子宫颈 粘液、输卵管液和卵泡液，以及输卵管上皮细胞等，都有助于清除精子表面的抑制因 子，促进获能和发生AR。 但这种对体内获能的研究，经常受到许多条件的限制。例如，从雌性生殖道内，特 别是输卵管内回收到的精子数量太少，欲测定获能精子化学成分的改变非常困难；又 如，精子在体内总是与雌性生殖道分泌物接触，而雌性生殖道中存在着影响获能的因 子，人们很难控制这种复杂的体内环境，因而给研究耪子获能带来极大的困难。为此， 体外获能的研究方法应运而生f191。早期研究精子体外获能通常使用各种动物的体液(如 输卵管液、滤泡液和血清)，而这些体液的成分相对复杂，很难确定何种成分参与诱发 或支持精子获能。自从Toyoda等171最先报道了采用一种特定的化学培养基获得体外受 精成功以来，分析体外精子获能已成为比较容易的事情。体外获能技术可以较好地控制 实验条件，并可逐个分折获能及其相关因子。比如，可以将精子顺序地暴露于不同成分 的培养基中，使精子引起AR，以AR为指标研究精子获能的条件。近些年来的研究表 明，在体外获能机制的研究中，发展起来的实验手段几乎可以达到与体内获能相同的结 果，也就是说，体外获能的研究结果可以揭示体内获能的本质【191。 总之，精卵结合之前，精子应该具备如下能力：1有能力进行获能和顶体反应：2成 熟过程中获得的蛋白结合位点能适时暴露给卵母细胞以结合并穿过透明带：3有能力接近 卵母细胞并穿过透明带：4可以与卵母细胞膜融合并且将遗传物质带入到卵子的细胞质 中。精子体外获能的实质是模仿体内获能 东北林业大学硕}：学位论文 1．4影响精子体外获能的因素 1．4．1动物种类与精子来源部位 精子体外获能有种矧差异。一些物种(包括人类)的精子不需在获能液中加特别的 成分就可以进行体外5夷能。根据各种简单的基本平衡盐溶液培养基(BO或TALl)， 添加适当的能源物质干Ⅱ蛋白质(如血清和血清白蛋白)即可满足获能需要。而另一些物 种的精子则需要添加特殊的物质才能使获能成功进行【8】。不同动物精子获能所需的培养 条件不一样。一些物种的精子只需在普通培养液中即可获能，而另一些物种的精子则需 添加特殊的物质才能使获能成功。此外，从获能所需的时间而言，少则几十分钟，多则 7、8个小时。这些不同可能是由于精子质膜的物理和化学特征的本质差异造成的130J。 了解体内或体外获能所需要的最短时间对于受精的成功至关重要，但并非一成不交。在 一定范围内，该种动物精子所需获能时间取决于动物的生理状态以及培养基的理化成 分。或许保持精子膜稳定的各种条件能够延长获能时间。反之，扰乱膜稳定的各种条件 可缩短获能时间llⅥ。 尽管有许多报道认为，附睾尾精子和射出精子具有同等的成熟度和采精率，但是， 一般而言，附睾精子要比射出精子更容易进行体外受精，这可能是由于射出精子质膜比 附睾精子更加稳定。附睾尾精子和射出精子被认为具有同等的成熟度和采精率，但这两 类精子在体外的表现并不具有相同的特征。有许多报道认为，附睾精予和射出精子的体 外受精率相等【19J。