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不同条件下人免疫球蛋白类制品HCV抗体检测结果比较 　【摘要】 目的 主要探讨人免疫球蛋白类制品在不同条件下对HCV抗体检测结果的影响。方法 使用不同的四个生产厂家的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（ELISA），用两种不同的稀释液将免疫球蛋白的蛋白浓度稀释至1%。比较免疫球蛋白原液在酸性（pH4）条件下和中性条件下对检测结果的影响；人免疫球蛋白和静注人免疫球蛋白(pH4)加入稳定剂后对检测结果的影响；静注人免疫球蛋白在酸性条件（pH4）下和中性条件下对检测结果影响。结果 两种不同的稀释液对检测结果进行比较，结果完全一致；在酸性条件下，两种不同的稀释液，有一厂家检测结果OD值在灰区内。结论 酸性（pH4）条件下的制品不同厂家的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒检测结果有明显差异，使用不同的稀释液和制品中有无稳定剂对检测结果没有影响。 【关键词】 人免疫球蛋白 HCV抗体 ELISA 用酶联免疫吸附（ELISA）方法对原料血浆实施HBsAg、HCV抗体和HIV抗体的筛查有利于保障原料血浆的安全［1］。目前对原料血浆的筛查采用单采血浆站使用一种诊断试剂进行初筛，血液制品生产企业使用不同厂家的另一种诊断试剂进行复查，即便经过了两次严格的逐袋筛查，仍有因隐匿性丙肝感染而导致漏检的。目前公认，采用WHO推荐的低温乙醇法并经病毒灭活处理的人血白蛋白和免疫球蛋白是安全的血液制品［2］。即便如此，为进一步提高血液制品的安全性，今年国家食品药品监督管理局已要求血液制品生产企业积极摸索和建立人免疫球蛋白类制品进行HCV抗体和HIV抗体的检测方法及标准，鉴于此因，笔者选择10个批次的经低pH放孵病毒灭活的人免疫球蛋白，在同一蛋白浓度条件下（蛋白浓度为1%），对不同pH值条件和按制品工艺要求加入不同稳定剂，以及两种不同蛋白稀释液对HCV抗体检测结果的影响进行了比较，现报告如下。 　　1 材料与方法 1.1 样品来源 样品取自本所血液制剂室低pH放孵病毒灭活后的10批人免疫球蛋白原液（编号1～10）。 1.2 试剂与仪器 1.2.1 试剂 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（ELISA）分别由厂家A，批号：厂家B，批号20070107厂家C，批号20060802；厂家D，批号：2006085806、2006095807、2006115808。 1.2.2 仪器 酶标仪，型号：Multiskan Mk3（芬兰雷勃公司生产），洗板机，型号：Wellwash 4 Mk2（芬兰雷勃公司生产），检测按仪器和试剂盒要求操作。 1.3 稀释方法 （1）样品A 低pH放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，不含任何稳定剂，pH3.8～4.1；样品B：低pH放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为肌肉注射人免疫球蛋白，含氯化钠、甘氨酸、麦芽糖、硫柳汞，作为稳定剂，pH6.7～7.0；样品C：低pH放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为静注人免疫球蛋白，含麦芽糖作为稳定剂，pH3.8～4.1。分别使用生理盐水和相应的诊断试剂盒的稀释液将以上三类样品的蛋白浓度稀释为1%，pH值不做调整，为原制品pH值，所得样品编号为ⅠA1、ⅠA2； ⅡB1、ⅡB2； ⅠC1、ⅠC2，1为生理盐水稀释，2为诊断试剂盒稀释液稀释，Ⅰ为酸性条件下样品；Ⅱ为中性条件下样品。（2）将样品A的pH值调整为6.7～7.0；将样品B的pH值调整为3.8～4.1；将样品C的pH值调整为6.7～7.0，按方法（1）稀释以上样品，所得样品编号为ⅡA1、ⅡA2；ⅠB1、ⅠB2；ⅡC1、ⅡC2。 所得样品按各诊断试剂厂家说明书进行检测，灰区为CO值±15%的范围。 　　2 结果 应用不同稀释方法所获得的样品，用不同厂家的试剂盒进行检测，每个样品检测两孔，检测结果见表1。表1 10批不同条件的样品四个不同厂家试剂HCV抗体检测结果 　 3 讨论 以上结果表明，10批人免疫球蛋白类制品，对免疫球蛋白原液、人免疫球蛋白和静注人免疫球蛋白制品进行检测使用生理盐水稀释［3］和使用试剂盒稀释液稀释，然后按检测试剂说明书进行检测，其结果是完全一致的。经对免疫球蛋白原液（不含任何稳定剂），人免疫球蛋白（含稳定剂），静注人免疫球蛋白（含稳定剂），检测结果表明，不同的制品所含稳定剂与否对检测结果也没有影响；在低pH条件下，免疫球蛋白原液（低pH放孵后），静注人免疫球蛋白(pH4) 经两种不同稀释液稀释，发现厂家B的检测试剂盒10个批次的检品OD值均在灰区内，另外三个试剂厂家的检测结果均为阴性。文献报道用ELISA法检测HCV抗体灰区血样经重复检测有12.6%（11/87）的假阴性率［4］，并且对落在