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Chapter 9 Enzymatic catalysis kinetics 一、化学反应动力学基础 二、酶促反应动力学 三、可逆性抑制作用 四、影响酶反应的因素 一、化学反应动力学基础 A + B P 1. 零级反应 v=k 2. 一级反应 v=kc 3. 二级反应 v=kc2=kcAcB 二、酶催化动力学 Enzymatic kinetics Michaelis-Menten equation (1913) Km—米氏（M-M）常数 反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度 动力学参数的意义 （1）Km的意义： Km是酶的一个特性常数； Km值可以判断酶的专一性和天然底物； Km值最小的底物是酶的最适底物； Km值越小，酶与底物的亲和力越大。 c. 计算特定条件下反应速率与底物浓度之间的关系； d. 推断反应的方向和途径； （2）Vm和k3的意义： （3）kcat/Km的意义： Calculation of Km value Double-reciprocal plot 1 Km 1 = + v Vm CS Vm Eadic-Hofstee v v = - Km + Vm CS 酶的重要特征参数 分子量、等电点、Km值、最佳温度、pH Double substrates reaction (P366) Random mechanism Ordered mechanism Ping-pong mechanism Activator and Inhibitor 三、激活剂 抑制剂 抑制：可逆性与不可逆性抑制 Competitive inhibitor Reversible inhibitors Noncompetitive inhibitor Uncompetitive inhibitor a. Competitive Inhibition E + S ES P + E + I EI CS v=Vm CS + Km(1 + CI/Ki) b. Noncompetitive Inhibition E + S ES P + E + + I I EI + S EIS CS v =Vm (CS + Km)(1 + CI/Ki) c. Uncompetitive Inhibition E + S ES P + E + I ESI CS v = Vm Km + (1 + CI/Ki) CS (2) 不可逆抑制剂 有机磷化合物：与胆碱酯酶结合，使乙酰胆碱不能分解为乙酸和胆碱，引起神经中毒，因此被称为神经毒剂。 有机汞、有机砷化合物：与含巯基的酶或含硫辛酸辅酶的酶结合，从而使酶失活。 氰化物：与铁卟啉中的Fe 2+结合，阻抑细胞呼吸。 重金属(Ag, Cu, Pb, Hg)：机理不明 烷化剂（如碘乙酸等）：使酶中-SH烷化，失活 自杀性底物：潜伏态抑制剂 四、影响酶促反应速度的因素 Points 1. Michaelis-Menten （酶促动力学）方程的推导过程； 2. 可逆抑制的三种基本形式的特点，对酶的Vm、Km值的影响； 3. 影响酶活性的因素。 复习问答题 在电泳实验中，当溶液pH小于蛋白质（多肽或氨基酸）的pI时，蛋白向 极移动；分离氨基酸混合液时常用 离子交换树脂，为什么洗脱时要提高洗脱剂的pH和盐的浓度（P153）
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