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HLA-B27阳性患者血管紧张素转换酶基因检测分析 　 作者：徐茜，邢桂芝，陈梦芝，马荣芬 【关键词】 强直性脊椎炎 摘要：目的：探讨ACE基因多态与HLA-B27阳性的关系。方法：应用 PCR扩增方法检测68例HLA-B27阳性患者和50例正常对照者ACE基因的16内含子中的287bp片段缺失/插入多态性。结果：HLA-B27阳性患者ACE基因插入纯合型(I/I)频率明显高于正常对照X2=4.21，plt;0.05。结论：ACE基因插入纯合型(I/I)与HLA-B27阳性患者即强直性脊椎炎患者的易感性有关。 　　关键词： 血管紧张素转换酶基因； 基因多肽性； 强直性脊椎炎 　　Analysis of Angiotensin Convertible Enzyme (ACE)gene to HLA-B27 Positive Patients 　　Abstract： Objective: To study the relationship of ACE gene and HLA-B27 . Method:ACE gene was analyzed for inserting and losing polymorphism of the 287 fragment in intron 16 by polymerase chain reaction(PCR). Result: The analysis revealed that the frequency of homozygous insertion of ACE gene(I/I) in HLA-B27 positive group(68 cases) is obviously higher than that of normal group(50 cases). Conclusion: The result supports that the homozygous insertion type of ACE gene(I/I) could be involved in the HLA-B27 positive patients so as to as patients. 　　Key words: Angiotensin convertible enzyme(ACE)； Gene polymorphism； Askylosing spondylitis(AS) 　　强直性脊椎炎（AS）是严重的脊椎关节病，其合并症和致残率很高。其发病机理至今尚未完全阐明。近年来许多资料表明AS与遗传因素有关［1］。作者进行的实验研究，为从基因水平探索AS的发病机理提供了可能性。 　　1 材料和方法 　　1.1 病例选择：病例来自我院风湿免疫门诊就诊患者，经HLA-B27血清学检测为阳性患者同时伴有自觉症状，且经过影像学X片的检查，或采用骶髂关节CT检查确诊为AS的患者68例。男57例，女11例，男女比例5:1。最小年龄为2岁，最大年龄为54岁，平均年龄为26.5岁。 　　1.2 基因分型 　　1.2.1 基因组DNA提取：取外周血5ml，用2%EDTA-Na2抗凝（V：V=10：1）低渗破坏红细胞。酚/氯仿法从白细胞中提取基因组DNA，A260：A280≥1.8。 　　1.2.2 PCR扩增反应：ACE基因16内含子引物序列同文献［2］。反应体系25μl，含正向（P1）反向（P2）引物各4pmol，5x缓冲液5μl，DNA 0.05～0.1μg， 4种DNTP各125pmol， Taq DNA聚合酶0.5μ，混匀，表面覆盖液体石蜡。94℃预变性2min，然后94℃变性1min，58℃退火2min，72℃延伸1.5min，35个循环。 　　1.2.3 基因型鉴定：PCR产物用2%琼脂糖凝胶（含0.5μg/ml溴化乙啶）在100V电压下泳动20min，紫外灯下观察结果并确定基因型别。①显现490 bp一条区带者为ACE基因插入纯合型（I / I）。②只显现190 bp一条区带者为ACE基因缺失纯合型（D/D）。③如果490 bp和190 bp两条区带均显现者，则为ACE基因插入/缺失杂合型（I/D）。 　　1.3 统计学分析：计算两组基因型频率，组间频率比较用X2检验。Plt;0.05为统计学上有显著差异性。 　　　2 结果 　　2.1 正常对照组与B27阳性组基因型频率，见表1。 　　2.2 ACE基因16内含子中287 bp片段插入/缺失多态性电泳结果显示: B27阳性组较正常对照组的ACE基因插入纯合型（I/I）频率明显升高。相对数值分别为X2=4.21，Plt;0.05具有统计学意义。 　　表1 正常对照组与B27阳性组基因型频率（略） 　　2.3 如表1显示：68例HLA-B27阳性患者中