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基因修饰纳米纤维支架探究进展【摘要】纳米纤维支架以其良好的生物相容性和生物载体作用，在引导组织再生研究中的应用日益广泛，而将其与基因相结合应用于引导组织再生也成为组织工程研究的重要方向。本文就纳米纤维生物支架的种类和特性及合成，纳米纤维支架与基因结合的意义和方式，基因修饰的电纺纳米纤维膜的合成与结合，基因从纳米纤维支架中的释放，纳米纤维支架的应用和展望等研究进展作一综述。 【关键词】纳米纤维；组织工程；支架；引导组织再生；基因 【中图分类号】R783.1 【文献标志码】A 组织工程支架包括二维膜和三维支架，在引导组织再生（guided　tissue　regeneration，GTR）中起着重要的作用。组织工程支架一方面通过其空间形成能力，维护组织缺损和环境的稳定，为组织再生提供必要的条件；另一方面则通过在支架中添加活性物质，直接或间接地促进缺损愈合。纳米纤维结构的组织工程支架，以其取材广泛、性能可塑和结构可控成为近年来GTR研究的热点。组织工程支架加载的生物活性物质主要分为两类：其一是具有生物活性的蛋白质，如用于骨诱导形成的骨形态发生蛋白－2；其二则是基因，包括质粒和基因载体复合物。随着研究的深入，如何将基因工程技术与纳米支架结合，通过基因重组持续性地产生内源性活性物质，促进组织愈合成为GTR研究的新方向。 1　纳米纤维生物支架的种类和特性及合成 1.1纳米纤维支架的种类 纳米纤维组织工程支架材料来源复杂，既有碳纳米管等无机纳米材料，又有胶原和玻璃酸等天然有机材料，另外还有聚乙酸内酯－羟磷灰石（polycaprolactone-hydroxyapatite，PCL-HA）、胶原－羟磷灰石复合膜、左旋聚乳酸、聚醚砜和聚苯胺－间氨基苯甲酸－聚乳酸等高分子纳米材料或复合材料。此外，还涉及单壁碳纳米管－银纳米颗粒膜、PCL-二氧化硅、纳米羟磷灰石－聚酰胺6等。 1.2纳米纤维支架的特性 1.2.1较大的接触面积　纳米纤维支架具有较大的接触面积，可以提高细胞的亲和性，促进其黏附和增殖。Thapa等通过对比纳米结构与微米结构的聚乳酸－乙醇酸共聚物证实，膀胱平滑肌细胞在前者中具有更好的黏附性能。人间充质干细胞（mesenchymal　stem　cell，MSC）在纳米PCL上的黏附和迁移优于在微米尺度的PCL。 1.2.2改变细胞表型　Yim等证实，纳米结构可以促进MSC向神经系细胞分化。Li等则发现，相对于微米尺度的支架，在纳米支架上培养的软骨细胞有着更高的软骨基因和蛋白质表达。 1.2.3较高的孔隙率　纳米纤维支架具有较高的孔隙率，因而有利于营养供给和细胞迁移。纳米纤维支架较高的孔隙率和大孔径有利于骨组织的再生；而且，孔隙率与鼠骨髓干细胞和成纤维细胞的增殖和分布有关。 1.2.4尺度和结构　纳米纤维支架在尺度和结构上更接近细胞外基质，为细胞的黏附生长提供了更加良好的微环境。 1.3纳米生物纤维支架的合成 常见的纳米生物纤维支架的合成分为自组装法和电纺法。自组装纳米纤维支架是指生物大分子，通常是亲水性多肽在pH调节下，由非共价键如氢键和静电力等介导形成的具有纳米结构的水合物。目前，已经有学者制造出具有三维结构的自组装纳米支架，但有关基因修饰的自组装纳米支架的报道并不多。电纺法是合成纳米纤维支架的另一种方法，其原材料可以是无机物和天然有机材料或合成有机材料。各种材料形成的多聚物溶液通过高电压克服其表面张力，形成直径数百纳米的纤维，继而通过电纺方式形成纳米支架。电纺纳米支架具有良好的力学性能和细胞附着界面，通过改变纤维合成条件或表面修饰成为良好的生物活性物质的载体。 2　纳米纤维支架与基因结合的意义和方式 将基因与纤维支架结合，可以使基因局限于GTR部位，减少基因直接暴露于细胞外基质的时间，从而减少免疫攻击。将基因加载于生物支架，可以实现基因的控释，提高基因的转染率。这些已在一些研究中得到了证实。加载于纤维支架的基因具有缓释特性，这一特性可以降低病毒载体引起的急性炎症细胞因子的释放。纳米纤维组织工程支架可以分为二维膜和三维支架，两者在与DNA结合及释放上存在较为明显的差异。 3　基因修饰的电纺纳米纤维膜的合成与结合 3.1基因修饰的电纺纳米纤维膜的合成 基因修饰的电纺纳米纤维膜的合成主要分为两步。以Zhang等制作的PCL-聚乙烯亚胺（po-lyethylene　imine，PEI）-基因复合物为例。首先，将PCL与PEI以一定的比例溶于特定的溶液中，通过电纺技术形成PCL-PEI复合纳米纤维膜；将膜置于48孔板，加入含5μg基因的125mL的磷酸缓冲盐溶液培养1h，从而将基因固定于膜上。膜与基因的结合以特异及非特异性的结合力实现