仙龙颗粒对佐剂性关节炎大鼠血清IL-6含量影响.docxVIP

陕西中医学院２００７届硕士学位论文近年来随着传统医学研究逐渐被重视，研究水平不断提高，中医药治疗ＲＡ的基础和临床研究都取得了很大发展，显示了良好的前景。本研究课题是以导师李彦民主任医师的经验方仙龙颗粒为基础和依据，探讨其治疗类风湿性关节炎的疗效和作用机理。本病病因以风寒湿邪为主，病理变化主要是寒湿阻络，病理性质主要属实，治疗须以祛风除湿、通络止痛为基本原则。仙龙颗粒经２０余年临床观察该方治疗本病有较好的疗效，且未发现明显的毒副作用。该方由威灵仙１２份，秦艽１２份，制川乌９份，乌稍蛇９份，细辛３份，穿山龙９份组成。方中威灵仙性温味辛成，祛风除湿、通络止痛为君药；制川乌祛风除湿、温经止痛；细辛祛风散寒；秦艽祛风湿、止痹痛；穿山龙活血舒筋，共为臣药；乌稍蛇祛风通络，归肝经为使药。诸药和用，共奏祛风除湿，温经散寒，通络止痛之功效。动物实验证明该药对佐剂性关节炎大鼠能调整Ｔ淋巴细胞亚群的比值【２１Ｉ升高血红蛋白和红细胞；降低炎性组织ＰＧＥ２含量；降低血清ｎ虾一Ｑ含量和Ｎ０含量；有较好的抗炎和细胞免疫抑制作用啪；抗氧化作用；显著降低血清ＩＦＮ—Ｙ的含量；明显提高保护性因子ＩＬ－１０的含量；有免疫调节的治疗作用；改善原发和继发病变；限制降低血清ｓｌＣＡ］＾－Ｉ含量，增高ＩＬ一４水平，且无明显毒副作用。本课题将在已有研究的基础上，继续进行实验方面的观察，通过测定仙龙颗粒对佐剂性关节炎大鼠血清中ＩＬ．６含量的影响，从免疫学角度进一步探讨其作用机理。２仙龙颗粒对佐剂性关节炎大鼠血清ＩＬ－６含量的影响实验研究１、材料与方法１．１实验材料１．１．１实验动物：清洁级大鼠４８只，雌雄各半，体重２００＋２０９，固体颗粒鼠饲料两箱，均由第四军医大学实验动物中心提供，医动字第０８．０１５号。１．１．２药品及试剂：仙龙颗粒：由威灵仙、秦艽、制川乌、细辛、穿山龙、乌稍蛇等组成，以上药物均购自陕西中医学院国医堂，经陕西中医学院药物研究所鉴定，符合２０００年‘中华人民共和国药典质检标准》。加工成颗粒剂型，用蒸馏水分别配制成０．６９／ｍｌ、１．８９／ｍｌ、５．４９／ｍ１置冰箱４＂Ｃ储存备用。强的松片：由西安制药厂提供，规格为０．５ｒａｇ／片，批号：０５１１２１１３３。用蒸馏水配置成Ｏ．３ｍｇ／ｍｌ。完全弗氏佐剂：由陕西生物制品研究所提供，批号大鼠Ⅲ＿６放免试剂盒：由北京福瑞生物工程公司提供，批号：２００６１０２５１．１．３主要实验器械：放射免疫检测仪（ＳＮ．６９７ＢＧＡＭＭＡｃＯＩ刷ＴＥＲ）超低温冰箱（ＭＤＦ．３８１Ｅ，日本ＳＯＮＹＯＯ公司制造）１．２实验方法１．２．１动物分组：大鼠购回后适应性喂养一周，然后随机分为；Ａ组：正常对照组（简称：空白组）Ｂ组：模型对照组（简称：模型组）ｃ组：强的松对照组（简称：强的松组）Ｄ组：仙龙颗粒小剂量治疗组（简称：小剂量组）Ｅ组：仙龙颗粒中剂量治疗组（简称：中剂量组）Ｆ组：仙龙颗粒大剂量治疗组（简称：大剂量组）１．２．２佐剂性关节炎造模：陕西中医学院２００７届硕士学位论文除Ａ组外，于Ｂ、ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ组每只大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂Ｏ．１ｍｌ。注射弗氏完全佐剂后第２天，模型组动物造模侧足踝关节即呈现明显红肿反应，逐日加重，于第４天达到高峰，然后减轻。造模成功。１．２．３给药：造模成功后后开始灌胃，每只每次２ｍｌ。Ａ、Ｂ两组给以蒸馏水，ｃ组给以强的松液（Ｏ．３ｍｇ／ｍ１），Ｄ、Ｅ、Ｆ组分别给以仙龙小剂量溶液（Ｏ．６９／ｍ１）、中剂量溶液（１．Ｓｇ／ｍ１）、大剂量溶液（５．４９／ｍ１）（均按人鼠给药比例换算成常规剂量后配制），每天一次，连续给药２８天。１．２．４标本采集：灌胃结束后，将大鼠摘眼取血４－５ｍｌ，不抗凝，装入清洁试管备用。１．２．５检测指标：用放免法测定血清ＩＬ－６含量（由陕西中医学院同位素科协助完成）。１．２．６统计学处理：各组数据均以均数±标准差（Ｘ＋Ｓ）表示，各组间差异用ＳＳＰＳＩＩ软件包进行ｔ检验。２、实验结果２．１一般形态观察造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻，食欲下降，皮毛失去光泽，关节肿胀，跛行，耳廓充血，皮下结节出现。造模后第１２小时出现注射局部红肿，皮温升高，第四天组织肿胀达高峰，之后逐渐消退，于造模第１１天出现继发炎症反应，第１２至２９天发生广泛性炎症反应，鼠尾、耳、足、鼻、足、后肢及未注射的前肢均出现水肿、血管周围炎症、红斑和结节，第２ｌ天达高峰，病变从足跖波及四肢关节，且症状较原发时加重，出现跖红肿、增厚、触摸局部皮温升高，且有竖毛、活动及摄食减少、体重增加减慢、倦怠嗜卧等表现。空白对照组无异常变化。强的松与仙龙颗粒各组上述症状均有不同程度改善，模型组症状未见改善。４仙龙颗粒对佐剂性关节炎大鼠血清ＩＬ．－６含量的影响２．２仙龙颗粒对于ＡＡ大鼠血清ＩＬ－６的影响仙龙颗粒对于ＡＡ大