步长脑心通胶囊对脑血栓栓塞大鼠血浆磷脂水平影响.docxVIP

山西医科大学硕士学位论文刖舌脑血管病随着世界范围内人群预期寿命的延长和人口老龄化速度的加快，卒中发病率和患病率有逐年增高的趋势。在全世界，脑血管病是第一位的致残原因和第二位的致死原因。目前在全国乃至全球对缺血性中风的治疗还没有一个完全统一的标准，一般认为急性缺血性卒中治疗原则是早期溶栓和神经保护以及神经营养药物治疗，中医和中药治疗是中国脑血管病防治的特色‘１１。溶血磷脂酸（１ｙｓｏｐｈａｔｉｄｉｃａｃｉｄＬＰＡ）是国际国内近年发现的在血栓形成过程中起非常重要作用的分子。ＬＰＡ异常在心脑卒中的发生、发展过程中起着重要的作用‘２…““。９０％的ＬＰＡ由活化的血小板产生，ＬＰＡ形成后又促进血小板聚集，“。对血栓形成起正反馈作用，导致血栓形成：磷脂酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃａｃｉｄＰＡ）是缺血缺氧的标志物，血栓形成后，局部组织缺血缺氧，自由基产生，ＰＡ增高。因此，抑制衄栓形成特别是抑制血小板聚集是降低ＬＰＡ的手段．而改善缺血缺氧是使血浆ＰＡ水平下降的主要方法。步长脑心通胶囊由１２种中药组成，药理实验证明：该药对血小板黏附率有显著降低作用：可抑制ＡＤＰ诱导的血小板聚集；可降低全血粘度，促进微循环，并有一定的扩血管作用，从而改善缺血缺氧。因此，步长脑心通胶囊可能降低血浆ＬＰＡ和ＰＡ水平．研究表明，血栓形成开始于局部形成的持久性血小板粘集堆，血小板在血栓形成过程中起关键性作用。而９０％的ＬＰＡ由活化的血小板产生，ＬＰＡ形成后又促进血小板的聚集，对血栓形成起正反馈作用，导致凝血系统亢进，最终可能形成血栓“１。ＬＰＡ在动脉硬化过程中起关键作用。研究表明在人颈动脉粥样硬化斑块中，ＬＰＡ位于其脂质的中心内，是最强的导致瓶栓产生的易脱落的部分，血小板结合在动脉粥样硬化斑上，被激活而产生ＬＰＡ。但是否步长脑心通胶囊可能对血小板激活有抑制作用，并进而降低血浆ＬＰＡ的水平，未见报道。本实验将立足于以上思路展开，通过建立大鼠脑血栓形成模型，观察大鼠脑血栓形成后ＬＰＡ和ＰＡ的变化以及步长脑心通胶囊对ＬＰＡ和ＰＡ的影响，为临床上脑血栓诊断和治疗提供一定的实验依据。２山西医科大学硕士学位论文材料和方法１实验材料１，１实验动物Ｗｉｓｔａｒ大鼠２４只，健康，体重２８０－－３００９，雌雄不拘，山西医科大学实验动物中心提供。１、２药物与试剂及仪器１）步长脑心通胶囊：每粒含０．４９，批准文号：国药准字２）血栓诱导剂：凝血酶，长春海王药业，规格５００ｕ批号：２００３０３０１３）ＬＤ４－２Ａ离心机，北京医用离心机厂生产。４）Ｕｖ一７５４分光光度计，上海精密科学仪器有限公司生产。５）导管，经处理后的硬膜外麻醉管。６）５０ｐＬ微量进样器，上海医用激光仪器厂生产。７）ＬＰＡ及ＰＡ测定试剂，中国科学院泰福仕科技开发有限公司提供。８）ＨＥ染色所需试剂，山西医科大学病理学教研室提供。９）Ｂ１２０００医学图像分析系统，成都泰盟科技有限公司ｌＯ）其余普通试剂和仪器出山西医科大学动物实验中心提供。２实验方法２、１急性脑血栓模型制作参照张兆岩”’等的方法并加以简化改进建立大鼠脑血栓栓塞模型。术前禁饮食１２ｈ，大鼠用１０％水合氯醛（４—５ｍｌ／ｋｇ）腹腔注射麻醉后，仰卧位固定于手术台上。颈正中部纵向切开皮肤，切口长约２．５ｃｍ，分离颈部肌肉，游离出右侧颈总动脉（ＣｃＡ），从分叉处向上分离颈外动脉（ＥＣＡ）和颈内动脉（ＩＣＡ）。结扎ＥＣＡ，然后向颅底方向分离出翼腭动脉，并结扎其根部，仅保留ＩＣＡ入颅底主干；结扎ＣＣＡ，暂用２只微型动脉夹间隔一定距离夹闭ＩＣＡ，在近心端ＣＣｈ处用眼科剪剪－－ｄ，口，插入导管内已抽好血栓诱导剂（凝血酶ｌＯｕ＋生理盐水０．Ｏｌｍｌ）固定后，移去近导管端血管夹，少量血液流入导管头端，放置约ｌＯｍｉｎ形成一小血栓，然后移去另一只血管夹，缓慢将此血栓和凝皿酶注入ＩＣＡ后，拔出导管，并将ＣＣＡ切口处结扎，缝合切口：术后单笼饲养。假手术组手术操作过程同上，只是不注入血栓和凝血酶，而注入等量生理盐水。２、２动物分组山西医科大学硕士学位论文Ｗｉｓｔａｒ大鼠２４只随机分为４组，即正常对照组；实验对照组；药物试验组；假手术组，每组６只．２、３实验方法２４只大鼠均经腹主动脉取全血约４ｍｌ，检测ＬＰＡ和ＰＡ。实验对照组参照上述方法建立模型．术后３小时采血检测：药物试验组，术前每日０．４８９／ｋｇ脑心通灌胃，共７天。其余过程同实验对照组。２、４磷脂测定取全血，置于加入有特殊抗凝剂的试管中，以３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０一１５分钟，吸上清抽提及成分浓缩．分离，过滤，最后显色。于９０＂Ｃ水浴放置３５ｍｉｎ，利用７５４分光光度计进行光密度测定。２、５神经行为障碍程度评分标准除正常组外其余各组均于术后３ｈ观察动物行为障碍的程度并进行评分，评分标准参考Ｂｅｄｅｒｓｏｎ等“１的方法，记分如