低温预处理对大鼠脊髓损伤早期病理形态学改变及运动功能影响.docxVIP

华北煤炭医学院硕士学位论文  前  言  前言 早在 50 年代  人们就已将低温用于心血管直视手术  通过降低中枢神经系统温度 减少大脑的能量代谢需求 来保护脑和其它重要脏器 1965 年 Albin[1]首次成功地将局部脊 髓低温灌注技术[LSCC]应用于脊髓损伤[SCI]的实验性研究 研究结果表明低温可显著减轻 SCI 后病理形态学损害 并有助于神经功能的恢复 证实了低温对脊髓损伤具有保护作用 此后  随着低温技术的不断发展  低温逐渐成为 SCI 的一种有效治疗手段  应用于临床工 作中  近年来随着低温脑保护在神经外科围术期的广泛应用  低温脊髓保护在临床工作中 的应用也得到迅速发展  髓内肿瘤  血管畸形或血管丰富的肿瘤常规切除时  常因误夹 误伤周围重要结构引起脊髓损伤  并导致严重并发症  如果手术前应用局部脊髓低温技术 将脊髓进行低温预处理  是否可使脊髓既不受到损害  而且又能减少髓内手术造成的继发 性脊髓损伤 发挥其保护作用呢  本实验通过研究低温预处理对大鼠 SCI 早期病理形态学 改变及神经运动功能的影响 阐明了低温预处理对 SCI 的保护作用 并进一步讨论了低温 的作用机制  为低温在临床实践中的应用提供理论依据 4 华北煤炭医学院硕士学位论文 1. 实验材料 1.1 主要试剂 苏木素 伊红 硫瑾 硝酸银 吡啶 对苯二酚 无水亚硫酸钠 氯化金 草酸 硫代硫酸钠 多聚甲醛 戊二醛 PH 值 7.4 的 PBS PH 值 8.4 的硼酸缓冲液 中性树脂 无水乙醇 二甲苯 0.9%氯化钠水溶液 1.2 主要仪器 OLYMPUS 光学显微镜 显微照相仪  材料与方法  材料与方法 本院病理教研室提供 本院病理教研室提供 唐山医疗试剂公司 本院病理教研室提供 本院病理教研室提供 本院病理教研室提供 本院病理教研室提供 唐山医疗试剂公司 本院病理教研室提供 本院病理教研室提供 唐山医疗试剂公司 唐山医疗试剂公司 自行配制 自行配制 唐山医疗试剂公司 唐山医疗试剂公司 唐山医疗试剂公司 本院试剂科 日本 日本 30  -70  水育箱  上海 电冰箱 电子温度计 医用电动吸引器  5  上海 上海 上海 华北煤炭医学院硕士学位论文 图象分析仪 Hplas- 100 高清晰度彩色病理图文分析系统 立体定向仪 自制脊髓撞击器 1.3 实验动物 雌性 SD 大鼠  材料与方法 日本 武汉 上海 北京动物养殖中心 2. 实验方法 2.1 脊髓损伤模型的建立 按 Wrathall 和 Pattegrew 于 1985 年采用的改良 Allen 氏打击法制模[2] 2.1.1 致伤器的制作和原理 1.制作一个底端呈弧形凹面 状吻合 (附图 1)  直径为 3mm 的尼龙材料撞杆  且弧形凹面与脊髓曲度形 2.制作一 10g 重的不锈钢棒及标有刻度的玻璃管  使不锈钢棒能在玻璃管内自由下落 3.将尼龙撞杆植入玻璃管的末端 使玻璃管直立在动物脊髓表面  用 10g 不锈钢棒在 5cm 高度沿玻璃管垂直自由下落 撞击撞杆造成脊髓损伤(附图 2) 由于尼龙撞杆与脊髓背 表面有充分的接触面积  保证了各大鼠脊髓损伤程度的均一性  且不锈钢棒从一较低高度 下落  它与撞杆重量相差较大  保证了打击瞬间的稳定性[3] 2.1.2 手术定位及脊髓致伤 1. 2%的戊巴比妥钠 (30mg/kg) 腹腔麻醉 2.麻醉后大鼠俯卧位 固定于立体定向仪上 无菌术切除 T11 12 13 椎板 暴露脊髓 硬膜  (附图 3) 3. 用致伤器按上述方法致伤 T12 段脊髓 2.2 实验动物分组  撞击后可见大鼠尾部剧烈摆动(附图 4) 43 只体重 250-275g 健康  成年 SD 大鼠随机分为四组 A 组 正常对照组  单纯去除椎板而不损伤脊髓  (4 只大鼠) B 组 低温预处理对照组  去除椎板后  硬膜外局部 4  低温生理盐水灌注 1h 不损伤 脊髓 C 组 常温下损伤组 常温下用改良 Allen 氏打击法损伤脊髓  (13 只大鼠) (13 只大鼠) D 组 低温预处理损伤组 经低温生理盐水灌注 1h 后 用改良 Allen 氏打击法损伤脊髓 (13 只大鼠) 6 华北煤炭医学院硕士学位论文  材料与方法 2.3 低温预处理方法及温度监测 1.用缝线向上悬挂手术切口周边皮肤 使其形成一小蓄水池[4] 开椎板后 保留脊髓硬膜 采用 4  低温生理盐水通过输液管在一端灌注  流量为 50ml/min 同时用吸引器在另一端 向外引流(附图 5) 灌注时间为 1h 2.电子体温计分别置于大鼠椎旁肌及直肠内监测低温灌注前后脊髓及直肠的温度变化 2.4 标