关节炎疼痛对大鼠脊髓星形胶质细胞和促炎性细胞因子的影响.docxVIP

引言关节炎是常见病，以膝关节为例，从西安较低的膝骨关节炎患病率 12.1%[1]到上海高达 51.79%的膝骨关节炎发病率[2]。骨关节病变引发的长期疼痛是困扰关节炎患者的首要症状，并且严重影响患者的正常工作和生活。目前关节炎疼痛的治疗主要以抗炎镇痛药物为主，兼以关节腔注射软骨保护药物及麻醉剂神经阻滞，但往往疗效欠佳，而且长期服用抗炎镇痛药物会引起胃十二指肠溃疡和肾脏损害[3,4]。因此，进一步深入地研究关节炎疼痛产生的机制，寻找更为安全有效的治疗方法就显得十分必要。关节炎持续性疼痛产生的原因，可能与外周敏化组织持续释放致痛物质[5]和中枢敏化现象[6]相关。组织损伤所致的外周敏化，使受损细胞释放炎性介质，激活炎性细胞，引起发热反应，参与炎性损伤。细胞因子与其它炎性介质相似，有时可直接刺激伤害性感受器并使之去极化，导致前列腺素 E2 (Prostaglandin E2, PGE2)等因子释放。在急性炎症期，细胞因子通过受体相关激酶及离子通道的磷酸化作用，引起致敏作用。而在慢性炎症期，受体的转录增量调节起主导作用。与炎性疼痛相关的细胞因子有肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1(Interleukin-1, IL-1)、白细胞介素-6(Interleukin-6, IL-6)[7,8,9]及趋化因子白细胞介素-8(Interleukin-8, IL-8)，皮内注射这些细胞因子可产生机械性或热痛觉过敏。在动物炎性模型中，TNF 抗体能减少痛敏的发生。最新的抗 TNF 疗法能明显减轻类风湿性关节炎的疼痛程度[10]。IL-1拮抗剂[11]可有效抑制强啡肽诱发的痛敏。另外，关节炎还可能导致中枢敏化现象，初级传入神经元 C 纤维被炎性介质反复刺激激活，致使中枢神经通路激活产生实质变。在炎症状态下，外周伤害刺激经初级传入神元 C 纤维传入，并释放谷氨酸、神经肽、神经营养因子等。这些细胞因子发挥介质作用，使脊髓神经元致敏，引起损伤区周围正常组织对机械刺激或阈上刺激的反应增强，痛敏区范围扩大，持续时间延长，强度增加，兴奋阈下降而出现痛敏。炎性刺激增加初级传导纤维肽类递质释放，刺激第二信使系统，增加 Ca2+内流和蛋白磷酸化，使蛋白激酶炎症激活作用延长，并产生转录变异，使脊髓背角神经元反应增强，从而产生持续性疼痛，并可能出现异常性疼痛。研究证实，胶质细胞是存在于中枢神经系统疾病的免疫细胞。胶质细胞参与了异常性疼痛的形成过程[12]，在外周炎性疼痛、慢性坐骨神经痛等多种疼痛模型中都可以观察到中枢胶质细胞的激活，其可能机制为激活的胶质细胞释放经典的致痛物质，如活性氧化产物、NO、花生四烯酸、白细胞三烯、前列腺素（Prostaglandin, PG）、兴奋性氨基酸（Excitatory amino acid, EAAs）、神经生长因子（Nerve growth factor, NGF）等等。这些从胶质细胞释放的神经活性物质作用于脊髓背角的痛觉传递神经元使其处于敏化状态。此外，被激活的胶质细胞还可以进一步加强初级传入纤维终末伤害性神1-经递质的释放。胶质细胞受到激活而释放促炎性细胞因子，如 IL-1，IL-6，TNF-α等[13]，这些细胞因子的受体在胶质细胞和神经元上都有表达，这些因子本身也具有强大的致痛作用[14]。因此胶质细胞可能与关节炎疼痛的产生密切相关。慢性炎症痛的治疗是世界医学难题之一，各类抗炎药虽有一定疗效，但都因同时具有不同程度的不良反应而限制了其对疼痛的有效治疗。关节炎性病变引发的慢性疼痛是困扰关节炎患者的首要症状，严重影响患者的工作和生活，现有临床治疗方法常不能有效缓解关节炎患者的慢性疼痛[15]。因此，有必要深入研究关节炎疼痛产生的机制，寻求更为有效的治疗方法。近年来的研究表明，脊髓中胶质细胞激活及其促炎性细胞因子在炎性疼痛的产生和维持中发挥着重要作用[16,17]，但脊髓中胶质细胞激活及其促炎性细胞因子与关节炎慢性疼痛的关系并不清楚。本课题利用左踝关节腔内注射完全弗氏佐剂制备佐剂关节炎疼痛大鼠模型，探讨关节炎疼痛发生、发展与中枢神经系统胶质细胞的激活和及其释放的促炎症细胞因子如 TNF-α、IL-1β的关系，进一步研究慢性关节炎性疼痛的病理生理机制。2-1 材料与方法1.1 实验动物Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重150～180g（来源于同济医学院实验动物中心），随机分为对照组和实验组，每组各20只。所有大鼠饲养在单塑料笼内，光照和无光照时间按12h的周期交替循环。室温20℃-25℃，自由进食和饮水。1.2 主要试剂及仪器实验中主要的试剂及仪器有：1)完全弗氏佐剂（CFA）购于sigma公司，批号：014K8927。2)大鼠IL-1βELISA试剂盒(产品编号：EK03