持续静压力对成骨样细胞整合素α5和整合素β1mRNA表达影响.docxVIP

硕士学位论文前言口腔正畸治疗是通过在牙齿上施加力的作用，使错位牙移动到正常位置的过程，与机械力的控制和使用密切相关，力作用于牙齿及其他相关结构。引起包括牙槽骨、骨缝、甚至颞下颌关节区域的骨改建ｆ１】．力是—个机械信号，而牙的移动是牙槽骨生物学改建的结果，机械信号作用于机体后最终转变为生物学效应嘲．成骨细胞是牙槽骨改建的主要效应细胞，同时也对破骨细胞的分化和成熟具有重要的调控作用［３１１４］．整合素家族是一类重要的细胞表面受体，每个成员由口、Ｂ两条链（亚单位）靠非共价键连接而成异二聚体，主要介导细胞与细胞外基质的粘附，还可介导细胞间的粘附，它参与细胞的多种生理功能，如细胞的生长、发育、分化、凋亡等嘲．近年的研究表明，整合素还可作为介导信号传递的膜分子，通过独特的途径转导信号，参与细胞多种生理功能和病理变化。现在已经发现有１８种ａ亚单位、８种Ｂ亚单位网。口亚单位和９亚单位可以组合成２０多种不同形式的整合素分子，大多数整合素家族的成员是以细胞外基质蛋白的受体发挥作用的川．国内外研究证明成骨细胞表面表达多种整合素亚单位，其中包括口５Ｂ１，ａ５８１是纤维粘连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）的受体嗍．纤维粘连蛋白在牙槽骨的改建、修复等过程中起重要作用，并且在机械刺激引起的信号传导中发挥重要作用．成骨细胞可以粘附表达纤维粘连蛋白，与其作用方式可能是通过其受体ｎ５Ｂ１来调节的．因此研究成骨细胞在机械应力作用下整合素ｄ５、ＢＩｍＲＮＡ的改变有重要意义。本研究利用自制的压力装置对成骨样细胞ＭＧ－６３施加持续压力，并用逆转录聚合酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，盯一ＰｃＲ）检测在持续静压力（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙｃｏｍｐｒｅｓｓｉｖｅｐｒｅｓｓｕｒｅ，ＣＯＰ）作用下，整合素ｄ５和ＢＩｍＲＮＡ的表达，以探讨机械压力作用下整合素ｄ５口１在正畸骨改建中的作用机制，为进～步探讨正畸治疗中力是如何传递到细胞并引起组织改建的机理提供理论依据。硕士学位论文第一章实验材料及试剂第一章实验材料及试剂１．１主要仪器与器材ＢＣＭ－－１０００墅生物洁净工作台（苏于｝｛苏净），Ａｘｉｏｖｅｒｔ２００倒置相差显徽镜和照相系统（ＣａｒｌＺｃｉｓｓＪａｐａｎ），二氧化碳孵箱ＣｒｎｅｒｍｏＦ嘲ＵＳＡ），ＰＨＳ．－－３Ｃ（ｇｒｅｉｎｅｒｂｉｏ－－ｏｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ），大小滤爨＜驴Ｉ妞ｃｆｂｉ洲嫩，Ｃ，ｅｒｍｎｙ），细缒计数板（上海求精），各型量筒，烧杯，移液管，６ｅｒａ玻璃培养皿，Ｗｅｌｌｓｃ跚ＭＫ－３型全自动多功能酶标仪（ＬａｂｓｙｓｔｅｍｓＤｒａｇｏｎ，Ｆｉｎｌａｎｄ）＇微量加样器（Ｂｉｏｈｉｔ，Ｆｉｎｌａｎｄ），ＤＵ５３０紫外分光光度计（Ｂａｃｋｍａｎ，ＵＳＡ），ＰＣＲｓｙｓｔｅｍ２７００型ＰＣＲ扩增仪（ＧｅｎｅＡｍｐ，Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ），ＤＹＹ－ＩＵ型凝胶电泳仪（北京六—），ＧｅｌＤｏｃ２０００凝胶成像系统（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，ＵＳＡ），压力锅（沈阳红双喜），压力表（上海荣华仪表厂）．１．２主要试剂高糖嘲朗培养基（Ｓｉｇｍａ，ｕｓＡ），Ｄ－Ｈａｎｋｓ（湘雅二医院医院中心实验室自配），Ｈｅｐｅｓ（湘雅二医院医院中心实验室自配）胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ，ｕＳＡ），胰酶（Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ），ＰＢＳ（武汉博士德），青霉素（华北制药）。链霉素（华北制药），噻唑蓝㈣（上海生工），二甲基亚砜（Ｄ惦ｏ），ＴＲＩｚｏｌ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ），逆转录试剂盒（腿Ｉ，立陶宛＞，Ｔａｑ“酶（ＭＢＩ，立陶宛），ＰＣＲ引物（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，璐Ａ），ｐＵＣｌ９蜊＾ｎ６ＰＩ（ＨｐａＩｆ）Ｍａｒｋｅｒ（北，京天为），ＥＰ管，Ｔｉｐ头（Ａｘｙｇｅｎ，ＵＳＡ）。Ｔｒｉｓ－ｂａｓｅ（上海生工），琼脂糖（Ａｇｎ＇ａｒｏｓｅ，Ｓｐａｉｎ），四甲基乙胺（上海生工），过硫酸胺（ＡＰＳ）（上海生工），氯仿、无水乙醇、异丙醇、硼酸、冰醋酸、硝酸银、氢氧化钠、哦液、溴化乙锭（ＥＢ）、甲醇等．?１．３细胞来源粥一６３细胞株由中南大学湘雅二医院内分泌研究所惠赠．１．４主要试剂配制所用玻璃器皿均按消毒流程清洗、泡酸，自来水、双蒸水依次冲洗干净后烤干放置，用前消毒、烤干使用。双抗的配制与分装：在无菌的条件下将青、链霉素各８０万单位一起溶于８０Ｍ灭菌的纯化水中（简称双抗），溶解混匀后分别分装于消毒好的青霉素小瓶中，封口、－２０＂Ｃ保存２型酸度计（上海雷磁），２５ｍｌ塑料培养瓶（ｇｒｅｉｎｅｒｂｉｏ－ｏｎｅ，删?各型培养板硕士学位论文第一章实验材料及试剂备用．Ｉ）ＭＥＭ的配制：将一包ＤＭＥＭ粉剂（５０９）溶于１０００ｍｌ蒸馏水中，用玻璃棒搅拌使之充分溶解，加入Ｈｅｐｅｓ粉２．３８克，再加入ＮａＨＣ０３，调ＰＨ值至７．２－７．４，移入超净台中，大滤器负压抽滤