P38MAPK在急性胰腺炎肺损伤发病机制中作用及清胰汤影响实验的研究.pdfVIP

P38MAPK在急性胰腺炎肺损伤发病机制中的作用 及清胰汤影响的实验研究 硕士研究生：张庆凯 指导教师：陈海龙 教授 专业名称：中西医结合临床 刖 吾 急腹症是一类以急性腹痛为突出表现，需要早期诊断和紧急处理 的腹部疾病，特点为发病急，进展快，变化多，病情重，一旦诊断延 误，治疗方针不当将会给病人带来严重危害甚至死亡。而急腹症又往 往伴有局部或全身感染。究其原因，多为细菌及内毒素易位弥散入血 感染所致。重症急腹症(如重症急性胰腺炎)可导致全身炎症反应综 MODS的形成多与体内大量内毒素生成有关¨’。大量文献报道重症急 性胰腺炎(SAP)所至的SIRS时的首要攻击器官为肺组织。作为由内 毒素血症所致全身炎症反应时的主要效应细胞，中性粒细胞在受到趋 化因子及细胞间粘附分子(ICAM．1)作用时发生趋化，粘附，贴附游 走到血管外，到达创伤或感染局部，通过吞噬，呼吸爆发和脱颗粒幢’ 。’，一方面可以杀灭病原菌，保护机体；另一方面若反应过度，则产 生大量氧自由基，并且释放组织胺、白三烯等炎症介质，又可造成细 胞损伤以及血管通透性增加等，加重了器官、组织的炎症损伤。而另 一炎症效应细胞单核一巨噬细胞在受到炎症攻击后释放大量的NO、TNF— a、IL-1、IL-6等促炎症细胞因子，进一步激活炎症相关细胞的活化， 释放大量的氧自由基、蛋白酶、水解酶类等，加重了组织、器官的损 伤。而炎症效应细胞的活化是通过胞膜、胞浆i胞核的信号传导通路 将炎症信号传递到胞核内，从而启动炎症因子的大量转录和释放。 大量临床资料证实，发生全身炎症反应的患者，或是发生脓毒症 的患者，即使对其及时应用抗生素及其它辅助治疗亦未能降低其临床 死亡率。根据以往的实验研究证实，细菌内毒素(脂多糖LPS)可激活 细胞内重要的蛋白激酶MAPK家族成员，如P38，并最终导致NF-kB、 活化蛋白(AP-I)等核转录因子的活化，进而激活炎症因子的基因转录， 诱发炎症瀑布级联效应，导致炎症继续发展和放大，演变成全身炎症 反应综合征(SIRS)或脓毒症，ARDS等严重病症““。“’。以上所及丝 因子大量释放的过程是在炎症早期极短的时间内即告完成，而此过程 一旦发生即为不可逆。因此，在炎症早期即阻断炎症信号的传导，进 而控制NF-kB等核转录因子的活化已成为目前炎症领域研究的重点。 kinase P38是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen—activatedprotein MAPK)家族中重要的成员之一，是介导细胞反应的重要信号传导系统。 大量实验证实，P38MAPK在介导多种炎症细胞因子产生的信号传导中起 性的抑制P38MAPK的活性，显著降低炎症细胞因子的产生与释放。中 药清胰汤是经过多年临床验证行之有效的治疗急性胰腺炎的方剂。利 用其通里攻下、活血化淤、清热解毒之功效，亦可显著降低血中内毒 素水平，减轻重症急性胰腺炎肺损伤的程度。本实验旨在研究重症急 性胰腺炎肺损伤时，通过对中药清胰汤与抑制剂SB203580作用的比较， 探讨中药清胰汤在治疗重症急性胰腺炎肺损伤时与P38MAPK活性之间 的关系，以及对肺组织IC／蝴-I活性的表达，肺组织NO、TNF—a，血中 内毒素、淀粉酶水平的影响，试图为临床中西医结合防治重症急性胰 腺炎肺损伤提供新的理论依据和方法论指导。 ·6· 材料与方法 1．实验分组：健康纯雄性SD大鼠，体重180．2209，(大连医科大 学实验动物中心提供)。随机分为：假手术组、模型组、清胰汤组、抑 制剂组。每组16只。 2．材料与仪器： (1)紫外分光光度计、电子天平、电热恒温热水器： (2)低温超速离心机，德国BAKEMAN； (3)电热干燥箱： (4)电泳仪，美国：倒置显微镜，日本； (5)NO检测试剂盒，南京建成； (6)TNF．a放射免疫试剂盒，北京： (7)内毒素检测试剂盒，上海伊华； (8)抑制剂SB203580，美国SIGMA公司；