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第五章 糖基磷脂酰肌醇化蛋白及有关糖复合物 蛋白质锚定在膜表面的新方式 还记得脂筏吗？ 脂筏的组成成分 糖基磷脂酰肌醇化蛋白 一类由蛋白质、脂质和糖链三者共价结合的复杂的糖复合物——糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol, GPI)化蛋白。 GPI蛋白的分布 1985年以锥虫表面抗原为例阐明其结构 GPI蛋白广泛存在于真核生物，包括原生动物、酵母、粘菌、无脊椎动物等以及哺乳动物的血液、肝、肾、胎盘和脑等组织。 目前已发现近百种GPI蛋白，包括多种水解酶、细胞粘附分子、哺乳动物细胞表面抗原和受体、原虫抗原、补体调节蛋白、朊病毒等。 GPI化蛋白的种类和分布举例 GPI化蛋白的基本结构 蛋白质： C末端残基与GPI锚相连，通常为Gly、Ala、Ser、Cys、Asp、Asn。有些本身是糖蛋白。 磷酸乙醇胺桥 糖链: 接在肌醇磷酸的6位 共有的四糖结构：Man-Man-Man-GlcN 肌醇磷酸 插入脂双层内的长脂肪链： 脂酰甘油或甘油醚；极个别被神经酰胺取代。 GPI化蛋白的结构要点 结构组成 脂肪链与甘油的连接方式 糖链的修饰变化 糖链与肽链的连接 极个别脂酰甘油被Ceramide代替 其它GPI有关糖复合物 存在于一些寄生性原虫表面： 脂肽磷酸聚糖 (LPPG) 糖肌醇磷酸聚糖 (GIPL) 脂磷酸聚糖 (LPG) 糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖(glypican) 三种致命的原虫 布氏锥虫（ Trypanosoma brucei ）引起的非洲昏睡病在撒哈拉以南的非洲地区每年感染５０万人，如果得不到及时治疗，往往会“杀人于昏睡之中”。 枯氏锥虫（Trypanosoma cruzi）引起南美锥虫病，它由锥蝽叮咬人后排泄的粪便传播，在拉美地区每年导致５万人死亡。 硕大利什曼原虫（Leishmania major）引起的黑热病蔓延５大洲、８０多个国家，是公共卫生的严重威胁。 锥虫(Trypanosomes)和昏睡症(Sleeping Sickness ) 非洲昏睡病 锥虫寄生之谜 锥虫本身对抗体和补体高度敏感 它们却生活在布满免疫细胞的血液系统 它们可引发强烈的免疫反应 然而他们可以在同一宿主体内繁殖生活一年或更长，直至宿主死亡 the GPI anchor 锥虫表面的抗原变化 GPI锚可在锥虫表面形成高度密集的排列 锥虫表面于是形成由可变表面糖蛋白（Variant Surface Glycoproteins, VSGs）组成的致密外壳 这种外壳与利氏曼原虫表面的脂磷（酸）聚糖 相当 锥虫的基因组与VSG 锥虫为单细胞真核生物，其染色体为二倍体。布氏锥虫含有100个小染色体和20个较大染色体，编码VSG的基因在各种染色体上都有。 锥虫基因组中的6-10%编码VSGs (more than 1000 genes) 根据在染色体上的位置分为内部VSG基因和端粒VSG基因，VSG基因的表达总是在端粒的表达位点（Expression site, ES）上进行。表达位点有多个，但一定时期只激活一个。 在特定时期只有一种VSG基因表达，而其他999种都被关闭 VSG基因表达的转换以很低几率发生，如果宿主产生了对前一种VSG的抗体，则新的表达型就会迅速扩增起来 What is the advantage of expressing a single VSG? How is expression controlled? What mechanisms can you think of by which a cell could control gene expression and protein abundance? Antigenic variation 所有的VSGs都是65 kDa的 GPI蛋白，在细胞表面呈二聚体 蛋白的外端高度可变，但Cys的位置保守 其他非可变蛋白如转铁蛋白受体或己糖转运体隐藏在表面外壳内部 Antigenic variation 锥虫基因组中有1000个基因编码表面抗原 但每个特定时期只有一个VSG基因被表达 启动子调节？ 基因的位置？ 其他机制？ 转座效应 Transposition of VSG genes occurs by intra- or intermolecular recombination This explains switching but not really why one gene is active and all the others are silent 碱基的稀有修饰 染色质修饰调控基因表达 实际上发现失活和激活部位的一种特殊修饰（标记为J (b-glucosyl-hydroxy-methyluracil)有差异 But is this a c