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本文为增刊稿件 细胞培养液中葡萄糖浓度与人牙周膜细胞原代培养成功率的相关性研究 摘要 目的 探究细胞培养液中糖浓度对原代培养成功率的影响。方法 取60颗健康牙，随机分成3组，每组20颗，分别采用低糖、高糖、低糖+甘露醇培养液进行原代培养。记录每组原代培养成功数，以及首次传代时间、传代后获得稳定的成纤维细胞系的成功数。结果 原代培养的成功率依次为低糖：90.00%，高糖：60.00%，低糖+甘露醇：85.00%。结论 低糖较高糖培养液更有利于提高细胞原代培养的成功率。 [关键词] 低糖细胞培养液；高糖细胞培养液；原代培养 The correlation research on glucose concentration in cell culture medium and the success rate of primary culture of human periodontal ligament cells [Abstract] Objective：To Explore whether the glucose concentration of cell culture medium can affect the success rate of primary culture of human periodontal ligament cells or not. Methods: There are three groups which were used Low glucose medium、High glucose medium and Low glucose added mannitol medium，and ten tooth was cultured every group. Then , compare the success rate of primary culture，the first time of transfer of culture, and the success rate of passage cells. Morphology, immuneocytochemistry were used to identify the cell source. Results：The success rate in primary culture was，Low glucose 80%，High glucose 50%，Low glucose added mannitol 70%.Vimentin staining was positive for keratin stain was negative Conclusion：compared with Low glucose medium，High glucose medium will reduce the success rate of primary culture of human periodontal ligament cells. [Key words] low glucose cell culture medium；high glucose cell culture medium； primary cell culture ?mL-1，链霉素100ug?mL-1）的DMEM液中，送往实验室后，采用传统组织块法[11]，以双抗DMEM液冲洗牙根表面，使用锐利尖刀片轻轻刮取牙根中1/3的牙周膜组织，放入培养皿内，对于偏大的组织块，用眼科剪将组织修剪成约1x1mm3的组织小块。均匀铺于培养瓶底部，并加入含20%胎牛血清的DMEM细胞培养液，将培养瓶倒置，于细胞培养箱（5%CO2，37℃，100%湿度）孵育，3h后翻瓶继续培养。72h后首次换液，后间日换液。以有细胞游出，并呈现良好的生长状态为成功标准，记录原代培养成功数。 1.2.2 人牙周膜细胞传代培养 试验中，通常会采用原位传代的方法，使得细胞在培养瓶底部均匀生长[13]，传代后间日换液，待细胞相互接触融合达培养瓶底部80%左右时，1:3常规传代。记录首次传代时间（结果以x±s表示），以及获得稳定成纤维细胞系的成功数。 实验分组 实验共获取正畸牙30颗，随机分为三组，每组10颗，三组均采取上述组织块法培养，分别采用不同的培养液培养：低糖DMEM（LG组）,高糖DMEM（HG组），低糖DMEM+甘露醇（LG+甘露醇组）。其中LG组葡萄糖浓度为1000 mg?L-1,为人体内正常糖浓度范围；HG组培养液是以3.5g?L-1比例向低糖DMEM中加入D-葡萄糖粉，其最终葡萄糖浓度为4500mg?L-1；LG+甘露醇组培养液同样以3.5 g?L-1比例向低糖DM