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赵文静gcbi服务顾问上海其明信息技术有限公司

全基因组测序系列课程赵文静 GCBI服务顾问上海其明信息技术有限公司第二讲测序原理介绍 GCBI 主要内容测序原理介绍测序专业词汇 GCBI Sanger测序原理第一代测序，又称 “Sanger”法测序，或者叫”双脱氧法”测序，是由美国生物化学家 Frederick Sanger发明的。 GCBI Sanger测序原理 GCBI Sanger测序流程利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物，直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。 GCBI 第一代测序平台公司检测方法平台检测方法大约读长优点相对局限性高读长，准确度一通量低；样品制备成本 sanger+毛ABI3730/AB 次性达标率高，能很好 ABI 荧光/光学 600-1000bp 高，使之难以做大量的细管电泳 I3500 处理重复序列和多聚序平行测序列 GCBI 第二代测序目前最普遍的测序平台高通量测序平台测序原理 Illumina/Solexa Genome Analyzer 合成法测序(Sequencing by Synthesis) Ion Torrent 半导体测序 Roche/454 FLX