广西巴马小型猪白细胞介素17基因的克隆及其序列分析.pdfVIP

第五届中南地区实验动物科技交流会 论文汇编 毒、消肿抗炎。研究结果表明，贯黄感冒胶囊对甲型流感病毒H1NI有明显的抑制作用；对细菌内毒 素所致家兔发热有显著的解热作用；对1％琼脂所致大鼠足跖肿胀的形成有明显的抑制作用，并可抑 制二甲苯引起的小鼠毛细血管通透性的增加；能明显的抑制氨水和二氧化硫引起的小鼠咳嗽，具有 很好的止咳作用i但不能促进小鼠气管酚红排泌，不具有祛痰作用；贯黄感冒胶囊对金黄色葡萄球菌 感染小鼠死亡具有保护作用，可保护引起LD93金黄色葡萄球菌感染动物存括半数以上，因此，贯黄 感冒胶囊用于风热型感冒，具有良好的前景。 参考文献 [1】陈奇主鳊．中药药理研究方法学[M】．第一版．北京：人民卫生出版社，1993．244． 【2]徐叔云主鳊．药理实验方法学【M]．第二版．北京：人民卫生出版杜，1991．1314． C3】李广勋主编．中药药理毒理与临床[M】．第一版．天津；天津科技翻译出版套司，475 广西巴马小型猪白细胞 介素17基因的克隆及其序列分析‘ 熊艳芸，谢琪辉，罗廷荣“，陆芹章，廖素环，李军 (广西大学动物科学技术学院，南宁530004) 【摘要】用ConA刺激巴马小型猪的外周血淋巴细胞．22小时后提取总RNA，用 RT—PCR方法成功扩增出巴马小型猪白细胞介素t7(几一17)基因，将其克隆到 pMDl8一T载体上，进行序列分析。结果表明，克隆的IL一17的基因序列与C-enBank 上登录的猪IL—17基因序列同源性为99．4％。 【关键词】白细胞介素17；克隆；序列分析 白细胞介素17(interleukln17，IL一17)是一种由T细胞产生并通过表达于许多细胞上的受体发 挥作用的分泌型蛋白质，分子量为20KD，研究表明它可能属于一个能调节多种细胞因子产生的独特 的配体一受体家族““2。IL—17能活化转录因子NF—xB，并诱导成纤维细胞中的IL一6、IL一8和胞 间粘附分子ICAM一的表达，增强亚适浓度刺激因子如PHA刺激T细胞后的增殖。可溶性IL一17 可能会在免疫系统与造血系统之间起介导作用。而且，IL—17的受体在体内广泛存在，提示IL—17 可能具有比较重要和广泛的生物学功能”J。 2002年，郭莉等对人IL—17基因克隆、表达及生物学活性的研究作了相关的报道”J，对于小鼠 ·基盘项日：广西大学科学技术研究重点基金资助项目(合同编号：2003ZD01)．广西科技攻关硬日(桂科攻 0480001)。 作者筒舟：艉艳芸(1979一)，女，硕士研究生，主要研究方向：动物传染摘学与分子免疫学研究。 ※为通讯作者。 214 论文汇编 第五届中南地区实验动物科技交流会 IL—17的研究也有相关的报道Ho】。但是国内目前对于猪在这方面的研究尚属空白。本研究通过 对猪的外周血淋巴细胞刺激诱导后，采用反转录一聚合酶链(RT—PCR)技术在国内首次克隆了猪 IL—17基因，并对其序列组成、进化关系和功能相关性进行了初步分析。 1材料与方法 1．1材料 TRIZOL、淋巴细胞分离液、小牛血清、TaqDNA聚合酶、dNTP、MgCl2、青霉索和链霉素购自上海 vector、各种限制性内切酶购自Takara公司。其它 MI一1640、ConA、LPS购自Sigma公司。pMDl8一T cell 化学试剂为进口产品或国产分析纯产品。E DHSa本实验室保存。实验猪为2月龄广西巴马小 型猪，由广西大学巴马小型猪场提供。 1．2方法 1．2．1猪外周淋巴细胞的培养参照王子淑的方法‘“，从猪前腔静脉无菌采抗凝血10mL。用等 量的Hanks液稀释，取5mL上述稀释液缓慢地加人含有5mL的淋巴细胞分离液的离心管中 mL的Hanks液轻轻吹散。同上离心3次，沉淀的细胞用含有 心20分钟，去上清，沉淀物再加入9 100