外伤性癫痫大鼠前脑PSD-95的动态表达.pdfVIP

外伤性癫痫大鼠前脑PSD-95的动态表达.pdf

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498 ChinJNervMentDis Vo1.36,No.8 August2010 · 论 著 · 外伤性癫痫大鼠前脑 PSD.95的动态表达 张高炼 黄建敏 赵邦 黄海能 邓元央 黄华东 【摘要】 目的 动态观察突触后密度蛋白一95(PSD-95)在外伤性癫痫(PTE)大鼠前脑的表达,探讨有关发病机制。方法 sD大 鼠70只,随机分为实验组4O只和对照组30只。实验组行立体定向注射 1000nmolFeC1::于大鼠右侧运动皮层致痫,在不同时间点行 为学视频、脑电图监测,用免疫组织化学法检测药物注射后 24h开始计算,24h、7d、14d、21d、30d大鼠前脑内PSD一95的表达。结 果 所有大 鼠在注射FeC1后不久记录到癫痫样放 电,7d达高峰;致痫后24h即町见前脑神经元PSD-95表达下降,7d达最低值,14 d后 同升 结论 FeCI,皮层注射可 以{}iJl成PTE动物模型。PSD-95表达减少可能为FeCI,致痫的共同途径 。 【关键词】 外伤性癫痫 大鼠 前脑 PSD-95 【中图分类号】 R742.1 【文献标识码】 A 刨伤性癫痫 (posttraumatieepilepsy,PTE)是重型颅脑损伤的 速率 l~L/min,注射 10 后留针5min。对照组在同一部位注 常见并发症之一。PTE的病理过程和生物标志物足 目前研究的 入等量的生理盐水。连续观察大鼠注射后 的癫痫行为 ,参考 热点 。研究证实,作为前脑颞叶癫痫海马神经元可塑性改变主 Racine的标准 ,取Ⅲ级以上发作者为成功模型。EEG在尖波 要特征的海马苔藓纤维异常出芽及伴随的突触重建 ,是癫痫发作 或棘波的基础上 现阵发性或持续性异常放电为模型成功。用 的主要病理变化。突触后致密区在神经元突触重建中起到了重 POWERLAB随机软f,卜(chart5.2)计算 痫样放电潜伏期、频率 要作片j。位于突触后致密区的突触后密度蛋 -95(postsynaptic 和波幅。 densityprotein95)参与 了神经元突触重建的过程。PSD.95的异 1.3 动物处理及组织处理 实验组于癫痫发作后 24h、7d、 常表达不仅可通过一系列级联反应引起癫痫发作,而且可引起神 14d、21d、30d川 10%水合氯醛 (400Illg/kg)腹腔注射麻醉,予 经元坏死或凋f_,成为癫痫发生和发展的一个重要原因 。但在 4%多聚甲醛左心空灌注同定40min,断头取脑 ,每时间点6只大 癫痫状态下,PSD.95与活化增生的星形胶质细胞、突触 町塑性重 鼠;对照组相同时间点同样方法 定 、断头取脑 ,每时问点6只大 建之间的关系,以及两者在PTE中的确切变化未能阐明。此次 鼠。于冰台上分离有侧前脑 ,标本予 蜡包埋切片,片厚4 m。 实验观察了创伤性癫痫前脑 CA3区PSD-95动态表达 ,探讨其对 1.4 免疫组织化学 PSD-95检测 :PSD-95抗体 (兔抗 鼠PSD.95 PTE的发病机制的意义。 多克隆抗体,型号:0.1mL、0.2mI)南Invitrogen公司提供。采用 链霉卯自素一生物素法,具体步骤按 ElivisionTMplus试剂盒说明 1 材料与方法 书进行。对照实验:PBS缓冲液代替一抗做阴性对照。 1.1 研究对象 采用 sD雄性大鼠70只,体质量200~250g,随 1.5图像分析和统计学处理 应用德 同莱卡公司 DMR+550型 机抽样法分为2组:生理盐水注射对照组3O只;实验组 40只。 彩色病理罔像分析系统对前脑齿状回及门区、CA3区进行冈像分 对照组30只,右运动区皮层注射9

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