高效液相色谱-串联质谱定量测定染毒大鼠血浆中梭曼-酪氨酸加合物.pdfVIP

第41卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 12期 2013年 12月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1801～1806 DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．30245 高效液相色谱-串联质谱定量测定染毒大鼠血浆中 梭曼-酪氨酸加合物 姜春来 暴 铱 郭 磊 刘 勤 陈佳 林 缨 吴弼东 谢剑炜 (军事医学科学院毒物药物研究所 ，北京 100850) 摘 要 针对神经性毒剂梭曼暴露后生物医学样品的准确性溯源分析这一迫切需求，建立了高效液相色谱． 串联质谱技术定量分析染毒大鼠血浆中梭曼一酪氨酸加合物的高灵敏度高特异性新方法。本研究建立 了有效 的亲和分离富集及超滤提取白蛋白、链霉蛋白酶酶解和固相萃取等前处理技术方法，在反相液相色谱．三重四 极杆质谱及正离子多反应监测模式下，对梭曼一酪氨酸加合物进行了定性和定量分析 ，检测离子对分别为 m／z260／214(梭曼一酪氨酸加合物)和m／z293／247(内标)。梭曼一酪氨酸加合物在0．1—500 g／L范围内呈 良好的线性关系(r 0．999)，检出限为0．02 L，定量限为0．05 L，回收率为90．1％一103．5％，其 日内 和 日间精密度均小于3％。对于以腹腔注射方式染毒后的SD大鼠(n=5)，考察了梭曼一酪氨酸加合物的代谢 动力学。结果表明，梭曼 ·酪氨酸加合物与染毒的梭曼剂量之间呈现较为明显的时效、量效关系，说明梭曼一酪 氨酸加合物可作为梭曼染毒后的暴露性生物标志物，可用于梭曼暴露后的溯源性检测。 关键词 梭曼 ；梭曼一酪氨酸加合物；液质联用；大鼠血浆；毒代动力学 1 引 言 目前，化学战对国家安全的威胁依然存在，化学恐怖、突发化学事件与次生化学灾害的危害也 日益 增加。神经性毒剂所引发的化学恐怖、化学中毒事件给人民的生命安全及 自然环境产生了严重的威胁。 梭曼 (Soman，GD)是一种挥发度适中、中毒作用极快且无特效拮抗剂的神经性毒剂，是难防难治化学毒 剂的典型代表。如何准确、灵敏、快速地检测神经性毒剂及相关物质，实现中毒的早期诊断和及时治疗 是神经性毒剂医学防治的主要研究内容。目前，多采用气相色谱．质谱联用 (GC—MS)、液相色谱一质谱联 用(LC—MS／MS)等技术 ¨ 对神经性毒剂原型或其降解产物进行检测。 对于神经性毒剂而言，其 自身水解、氧化产物或其进一步经代谢途径产生的代谢产物在体 内存在较 高的消除速率，部分产物还存在较高的体内背景，该类化合物暴露后存在时程较短，仅可能存在数 天 。然而神经性毒剂一蛋白质加合物则具有较长的半衰期，通常可存在数月之久，是一类较好的、溯源 性强的生物标志物。其中，白蛋白是血浆中丰度最高的蛋 白，占人血浆蛋白的50％～60％E9]。因此，神 经性毒剂与白蛋白的加合物——膦酰化白蛋白具有较高浓度及较长的在体寿命等特征，该种物质的检 测可以作为突发性化学事件中是否使用该类毒剂的准确医学证据之一，也可作为从事毒剂销毁等工作 的从业人员长期暴露后的健康评价的相关依据n BJ。 膦酰化 白蛋 白与其它神经性毒剂的作用性质相似，梭曼在膦酰化 白蛋 白上的特异性加合位点主要 为411位的酪氨酸残基 。梭曼膦酰化 白蛋白经过链霉蛋 白酶酶解后，可得到膦酸化的酪氨酸，即 形成特异的梭曼一酪氨酸加合物(GD—tyrosineadduct，GD-Tyr)，其分子量适中(见图1)，在质谱中易于离 牛F 斗。 一cooH 图1 梭曼及梭曼一酪氨酸加合物的化学结构 Fig．1 Chemicalstructuresof$omaxlandsoman(GD)一tyrosineadduct(Gd—Tyr) 2013-03-20收稿；2013-07-24接受 本文系国家 “重大新药创制”科技重大专项 “十二五”滚动项 目(No．2O12zX093O10o3一D01_01O，2012-2015)及