【doc】 整合素和粘着斑激酶在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的作用.docVIP

整合素和粘着斑激酶在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的作用 第3,1卷第期第l3贝 2005年10月 华中科技大学(医学版) \maMed1.]nivScil’echnolHuazhong Vo1.34NO.5I’.513 ()n.2005 博士后制度实施二十周年纪念专栏 整合素和粘着斑激酶在JWA基因抑制诱导的 人肺动脉平滑肌细胞迁移调控中的作用 陆俊羽张珍祥徐永健邹晖倪望陈士新 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科.武汉430030 * 摘要目的探讨整合素和荇斑激酶是否在JWA基因抑制诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PAsMCs)迁移调控 中起作用.方法前期实验将Jw.,核鸸基因构建到逆转录病毒载体plXSN上,转染人体外培养的人PASMCs内, 并证实转染的JWA特异性核酶基凶能抑制PASMCs内JwA基因的表达.该研究应用改良Boyden小室法测定细胞迁 移情况.半定RT—I’CR(sqRT—ICR)法测定细胞内整合素av,整合素B粘着斑激酶的mRNA表达量.Western blot法检测细胞内整合素m,整合素B,粘着斑激酶的蛋白表达量.结果与空载体转染细胞(PplXSN组)及未 转染细胞(PAsMcs组)比较.转染JWA核酶基因的细胞(P—JwARz组)迁移率显着增加,细胞内整合素¨,整 合素B粘着斑激酶的mRNA及蛋白表达量均显着增加.结论整合素,粘着斑激酶信号通路可能在JWA基因抑制 诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移中起调控作用. 关键词肌,平滑;整合素;粘着斑激酶 中图法分类号R322.7 RoleofIntegrinandFocalAdhesionKinaseintheRegulationofHumanPulmonary ArterySmoothMuscleCellsMigrationInducedbyInhibitionofJWAGeneinvitro IuJunyu,ZhangZhenxiang,XuYongjianetal DepartmentOJRespiratoryDiseases-TongjiHospital,TongJiMedic’alCollege, HuazhongUniversity0/S(iemeandTe{.hnology,Wuhan430030 AbstractObjectiveToinvestigatetheroleOfintegrinandfocaladhesionkinase(FAK)intheregulationOfhumanpul— monaryarterysmoothmusclecellsmigrationinducedbyinhibitionOfJWAgene1”7lvitro.MethodsJWAribozymegenewas subclonedintotheretroviralvectorplXSNandtherecombinantretrovira1vectorwastransfectedintotheculturedPASMCs. ThetransfectedJWAspecificribozymewasconfirmedtOinhibittheexpressionOfJWAgeneinthePASMCs.Cellmigration wasmeasuredbyusingmodifiedBoydenchamber.ThemRNAexpressionOfintegrina,,,integrin8andFAKincellswasde— tectedbysemi—quantitativeRT—PCRandtheproteinexpressionOfintegrina,,integrinB3andFAKbyWesternblot.Results IncontrasttOnormalPASMCsgroupandPASMCstransfectedonlywithpIXSNvector(P—plXSNgroup),thenumberOfmi— gratingcellsinthecellstransfectedwithJWAribozymegene(P—JWARZgroup)wasincreasedsignificantly.Meanwhile.the mRNAandproteinexpressionOfintegrina,,integrin良andFAKinthesecellswasalsoincreasedsignificantly.Conclusion IntegrinandFAKsignalpathwaymayplayaroleinmigrationregulationOfhumanPASMCsinducedbyinhibitionOfJWAgene expre