重组酪醇糖基转移酶表达条件的优化与纯化.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci，2010，38(17)：9002—9004 责任编辑 夏静 责任校对 卢磊 重组酪醇糖基转移酶表达条件的优化与纯化 胡耀辉，朱蕾，于寒松 (吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林长春13Ollg) 摘要 [目的]研 究利用现代生物技术制备红景天苷的方法。[方法]试验借助SDS．PAGE方法对重组 目的基因的表达紊件进行了优化， 比较 了诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响，以确定最佳诱导表达条件。[结果]最佳诱导表达条件为：诱导时 间5h，IPTG浓度0．6mmol／L，诱导温度37℃；用镍柱亲和层析对该含有组氨酸标签的融合蛋白进行纯化，获得 了纯度达99％以上的目 的蛋白。 结『论1该项研究为重组糖基转移酶的纯化提供了成功的经验。 关键词 酪醇糖基转移酶；重组蛋白；表达条件优化；纯化 中图分类号 R284．3 文献标识码 A 文章编号 0517—66l1(2010)17—09002—03 OptimizationandPu—ficationofExpressionConditionofRecombinationTyrosolGlycosyltransferase HUYao-huietal (Collegeoffoodengineering，JilinA culturMUniversity，Changehun，Jilin1301l8) Abstract fObjective1Theaimwastostudythepreparationofsalidrosidebasingonmodernbiotechnology．【MethodIBasingonSDS．PAGE method．tlleexpressionconditionofrecombinationgenewasoptimizedbyinvestigatingtheeffectsofinduetiontemperature．concentrationofIPTA， inductiontimeonthegeneexpression．R『esult1Theoptimuminductionconditionswereasfollows：inductiontimeof5h，Im concentrationof0．6 mmol／Landinduetiontemperatureof37℃．Th etargetproteinwih【purityof99％ wasobtainedbypurifyingthefusionproteinwithNi—ehroma— tographycolumn．1ConclusionIThestudyprovidesSuccessfulexperienceforthepurificationoftyrosolglycosyltransferase． Keywords Tyrosolglycosyltransferase：Recombinationprotein；Optimizationofexpressioncondition；Purification 红景天属蔷薇 目景天科 (Crassulaceae)红景天属(Rhodi— 白胨、酵母提取物、Tween-20、异丙基一8-D一硫代半乳糖苷 olaL．)多年生草本或亚灌木野生植物，其花 、根、茎的浸液均 (IPTG)、卡那霉素、低分子量蛋 白Marker硝酸纤维素滤膜 成红色，由此而得名 。红景天的有效成分为红景天苷。红 等，由北京鼎国生物公司生产 ；Ni—NTAHis—Bind，由Novagen 景天苷具有提高免疫力、抗肿瘤、降血糖、耐缺氧、抗微波辐 公司生产；小鼠抗IgG2b亚型单克隆抗体，HRP标记羊抗鼠 射、抗病毒、抗疲劳等功能，具有很高的经济价值和广阔的开 膀G和增强型 HRP．DAB底物显色试剂盒，由天根生化科技 发前景，现在红景天作为保健药物资源和食品资源已得到了 有限公司生产；常规化学试剂均为国产分析纯试剂。 国家的承认 。但是，野生红景天植物资源 日渐枯竭，而 1．1．3 主要仪器。SDS—PAGE电泳仪 ，由GE公司生产 ； 人工大面积栽培 由于根腐病等问题尚未解决，栽培还不成 TGL．16G高速冷冻离心机 ，由上海安亭科学仪器厂生产 ； 功 ，同时因为红景天中红景天苷含