兔口腔黏膜上皮干细胞分化为角膜上皮样细胞的体外研究.pdfVIP

中国药物与临床2011年 11月第 11卷第 11期ChineseRemedies＆Clinics，November2011,Vo1．11,No．11 · 1265 · · 实 验 研 究 · 兔口腔黏膜上皮干细胞分化为 角膜上皮样细胞的体外研究 张 岚 李 冰 郑晓汾 史静华 【摘 要】 目的 以羊膜做载体将兔口腔黏膜上皮干细胞诱导为角膜上皮样细胞，探讨 口腔黏膜上皮细胞 作为种子细胞体外培养构建组织工程角膜的技术方法 ，为眼表重建提供材料。方法 用Ⅳ型胶原黏附法分离纯化 口腔黏膜上皮干细胞．对体外培养的口腔黏膜干细胞进行免疫表型鉴定。将筛选后获得的口腔黏膜上皮干细胞 种植在去上皮羊膜表面体外培养，待细胞融合成单层后置入插入式培养皿中进行气液界面培养，促进细胞分化形 成复层。培养数 日后进行苏木素一伊红(HE)染色和免疫组织化学、光镜及透射电镜检测，观察羊膜一复层上皮组织 结构，免疫荧光检测干细胞特异性标志物P63以及角膜上皮细胞标志物角蛋白3(K3)并与角膜上皮组织 比较。 结果 体外诱导培养数天后，羊膜载体的口腔黏膜上皮细胞形成复层，在组织形态及生物学特性上与角膜上皮相 似。并且组织细胞P63、K3表达明显，角膜特异性生物学标志物免疫组织化学染色呈阳性。结论 在本实验的培 养条件下，获得的口腔黏膜上皮干细胞可在体外培养扩增，呈克隆f生生长，具有很强的增殖能力。口腔黏膜上皮 干细胞体外培养可构建类角膜上皮。 【关键词 】 干细胞；细胞培养技术；组织工程；上皮，角膜 Invitro studyOnthed1．t rentiation ofrabbitoral epithelium stem cellintocornealepithelioid cell zHANG Lan；LIBing,zHENGXiao-．Wen．SHIJing-huca*Departmentofophthalmology,zkJiangProvincialPeopletsHospi— td,Han~hou310014，China A【bstract】0bjective Toinvestigatethetechnologyofusingoralmucosalepithelialstemcellsasseedcellto fabricatetissueengineeringmucosa． whichstudiedonthecomealepithelioidcellinducedbyrabbitoralepithelium stemcellusingamnioticmembraneasvector．Methods Purificationbyadhesionmethodof1Vtypeeollagenandim— munohistochemistrytooral epithelium stem cellswereperofrmed．Thesepurifiedcellswereculturedonamnioticmem． brane．thenwereplacedonacultureinsertplateforair-liftingcultureafterofrmationofmonolayer,inordertopromote celldifferentiationintomultiplelaters．Severaldayslater,HE staining．immunohistochemistry．1ightandtransmission electronmicroscopydetectionwereperformed，aswellastheobservationtotheamni0tic—multiplelayerepithelialorga— nizationstructureandcomparisonbetweenspecialmarkerofneuralstemcellsfP63)，certainmarkerofcomeale