ELISA法与胶体金吸附法检测丙肝抗体特异性比较.docVIP

精品论文 参考文献 ELISA法与胶体金吸附法检测丙肝抗体特异性比较 贾凤英（山西省大同煤矿集团二医院　山西大同　037003） 【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）44-0193-02 【摘要】 目的 比较酶联免疫吸附试验（ELISA）与胶体金吸附试验检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的特异性。方法　用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测480例临床手术前患者血清。如酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测为阳性者，再采用胶体金吸附试验方法重新检测抗HCV。结果　480例样本中，抗HCV酶联免疫吸附试验法（ELISA）阳性10例，阳性率2.10%。胶体金吸附试验法阳性6例，阳性率1.25%。结论　酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测抗HCV检出率高出胶体金检测法0.85%。 【关键词】　丙型肝炎病毒（HCV）　酶联免疫吸附试验法（ELISA　胶体金吸附试验 HCV感染呈全球性分布，丙型肝炎（丙肝）流行与社会经济、卫生水平和文化素质等密切相关。我国HCV感染率平均约为3.2%。近年来，HCV感染呈上升趋势。对人类的危害已引起人们的高度重视。丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测已成为手术前检查的一项主要指标，现已广泛在医院临床患者中开展，本文报道480例血清标本的丙肝抗体检测实验。结果表明：酶联免疫吸附试验法（ELISA）的检出率高出胶体金检测法，所以用这两种方法筛选HCV抗体时，最终结果的判定是一个值得探讨的问题。 1　对象与方法 1.1标本来源：取自2008年2月至2010年12月，临床480例手术前住院患者血清。 1.2标本采集：清晨8点，空腹抽患者静脉血4 毫升于真空采血管中，静置1小时后，3000r/min，离心10分钟，分离血清后测定抗HCV。此过程应注意：（1）避免严重溶血。（2）无菌操作 尽量避免细菌污染，细菌生长所分泌的酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用或对实验产生非特异性干扰。（3）以无菌操作分离的血清样本可在2～8℃保存一周，需长时间保存者，应在—80℃以下冻存。冷冻保存的血清样本禁忌反复冻融，防止假阴性结果的出现。（4）血清样本如出现混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清液检测。再用ELISA法和胶体金法分别检测血清中的丙肝病毒抗体。 1.3测定方法：试剂操作按照试剂盒说明书，仪器操作按照仪器说明书。如酶联免疫吸附试验（ELISA）阳性，再用胶体金吸附试验重新检测抗HCV，观察胶体金是否阳性。 1.4结果判断：酶联免疫吸附试验法（ELISA）的检测结果以酶标分析仪判断结果为准，S/CO值ge;1为阳性；S/CO值lt;1为阴性，胶体金标法阳性：质控线“C”和检测线“T”各出现一条紫红色带。阴性：仅在质控线“C”出现一条紫红色带，实验无效：质控线“C”未出现条带。 2　结果 在住院480例手术前患者血清中，采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检出10例抗HCV阳性，两种酶联免疫吸附试验法（ELISA）试剂盒检测中6例阳性标本其S/CO值均大于10.0，另外4例阳性标本S/CO值1.0～2.5，而胶体金检测法只检出在酶联免疫吸附试验法（ELISA）中S/CO值大于10.0的6例抗HCV阳性标本为阳性，将酶联免疫吸附试验法（ELISA）阳性的10例血清标本再用胶体金法检测，依然只有S/CO值大于10.0的6例标本为阳性。 3　讨论 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的传染病，主要通过血液传播，对于丙型肝炎病毒抗体的检测，临床上常采用酶联免疫法对其进行检测，ELISA是目前HCV医学检验领域使用最广的抗HCV抗体检测方法，具有灵敏、特异、简单、稳定及易于自动化操作等优点，而胶体金法具有操作简便，时间短，观察直观，不需特殊设备，经济可靠等特点，且可单份测定。本研究结果表明：在采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗HCV S/CO值gt;10.0的标本，可能因感染HCV.病毒的时间较长，病毒量较大，其结果均呈阳性；而另外4份阳性标本有可能为感染HCV的“窗口期”，其S/CO值在1.0～2.5之间，较接近临界值，而胶体金标法对于S/CO值2.5的阳性标本特异性较低，故出现假阴性。出现这种结果的原因：第一，可能是因为金标法标记物不纯，易造成漏检，第二，因为现在国内外胶体金法靠肉眼鉴别弱阳性和阴性的方法本身就具有一定模糊性。因此，遇到S/CO值较低的血清标本，容易出现检测浅性色带不明显的问题，得到假阴性结果。 综上所述，ELISA法和胶体金法各有特点，这两种方法都不能作为HCV确诊试验使用，ELISA法适合于临床批量