ELISA（rat）法测定草乌九种炮制品的心脏毒性.docVIP

精品论文 参考文献 ELISA（rat）法测定草乌九种炮制品的心脏毒性 田春霞 石文宏（呼和浩特市食品药品检验所 内蒙古呼和浩特 010020） 【摘要】 目的 研究九种诃子制草乌炮制品：诃子制（诃子汤浸泡），酸奶制，盐水制，甘草制，清水制，去尖刮皮制，高压蒸制，酒炙，童便制，确定药物心脏毒性最小的最佳炮制方法。方法 根据草乌有强的心脏毒性，选择注射用盐酸多柔比星造心脏毒性模型。运用t检验分析方法，确定药物的最佳炮制方法。结果 高压蒸制炮制方法毒性最小。结论 清水制草乌，诃子制草乌，高压蒸制草乌炮制品产生心脏的毒性作用影响与空白组比较均无显著性。 【关键词】诃子制草乌 心脏毒性 草乌是乌头碱类植物，口服过量可致中毒。其中毒的主要成份为乌头碱，通过消化道或破损皮肤吸收，因毒性强吸收快，引起中毒过程迅速#8943;其中毒症状主要是心血管系统和神经系统中毒症状。文献报道草乌中毒患者均有心律失常，其中室性心律失常最多见(52．9％)，其次窦性心动过缓(32．4％)，房室传导阻滞(32．4％)。其毒理作用：(1)类异丙肾上腺素作用，对心脏直接作用导致异位节律，心肌各部分兴奋、传导和不应期不一致，复极不同步，引起室性早搏、室性心动过速、严重者室颤，心房颤动等-2J。(2)兴奋心脏迷走神经，降低窦房结的自律性和房室结的传导性，引起窦性心动过缓和房室传导阻滞-3J。(3)对神经系统后先兴奋后麻痹，局部皮肤粘嗅的感觉神经末梢先兴奋，有搔痒和烧灼感，继以麻痹、知觉丧失。过量的乌头碱可使血管运动中枢和呼吸中枢麻痹，甚至致死。 1 材料 1.1 受试样品：诃子制（诃子汤浸泡），酸奶制，盐水制，甘草制，清水制，去尖刮皮制，高压蒸制，酒炙，童便制，由内蒙古食品药品检验所提供。 配制方法：取各炮制品粉碎过7号筛，用0.5%羧甲基纤维素钠配制成混悬液。 1.2 对照药品及试剂： 注射用盐酸多柔比星，10mg/瓶0712028 浙江海正药业股份有限公司大鼠（rat）心肌肌钙蛋白I试剂盒 Made in U.S.A 批号ADL 19-2234。 1.3受试动物 SD大鼠,许可证号为SCXK(京)2005-0004，中心中国药品生物制品检定所提供。 实验环境：内蒙古食品药品检验所屏障级动物实验室，许可证号：SYXK(蒙)2009-0001。 1.4 试验仪器： 天平（型号:METTLE PL2002），梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，酶标仪 MULTISKAN MK3 Thermo公司。 2 试验方法 根据草乌有强的心脏毒性，选择注射用盐酸多柔比星造心脏毒性模型。采用大鼠（rat）心肌肌钙蛋白I试剂盒测定大鼠的心肌肌钙蛋白酶，以确定心肌损伤的程度，运用t检验分析方法，确定药物的最佳炮制方法。 取大鼠，健康，雌雄皆可，体重160gplusmn;20g，120只，随机分为11组，每组10只，分别为九种制草乌炮制品，阳性对照组注射用盐酸多柔比星，空白对照组。草乌各炮制品大鼠口服给药0.5g/kg，连续给药10天，注射用盐酸多柔比星隔日腹腔注射2.5mg/kg，共注射5次，空白组每日口服给药0.5%CMC溶液5ml/kg.以上各组于第10天给药1h后，腹主动脉取血，分离血清作为样品备用。 取出酶标板，依照次序对应分别加入6个浓度的标准品各100mu;l于空白微孔中；分别标记样品编号，加入100mu;l样品于空白微孔中；在标准品孔和样品孔中加入50mu;l酶标记溶液，36plusmn;2℃孵育反应60分钟，用洗涤液清洗5次，每次静置10-20秒，每孔加入底物A、B液各50mu;l，36plusmn;2℃避光孵育反应15分钟，每孔加入终止液各50mu;l，终止反应。与酶标仪上在450nm波长处读取各孔的OD值；B=标准品OD值、BO=标准品零点OD值，以B/BO%值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标在对数坐标纸上绘制标准曲线，曲线方程为Y=0.339X-0.320，R2=0.997；在标准曲线上查找对应的浓度范围。实验结果如表1。 表1 草乌炮制品肌钙蛋白实验结果 3 结果 由表1可以得出草乌9种炮制方法对心脏均有不同的毒性，毒性强弱的顺序为：去尖刮皮制草乌，童尿制，酸奶制，盐水制，酒炙草乌，甘草制草乌，清水制草乌，诃子制草乌，高压蒸制草乌。清水制草乌，诃子制草乌，高压蒸制草乌与空白组比较毒性无显著性差异，与阳性对照组比较有显著性差异。去尖刮皮组与阳性对照组比较有显著性