HPLC测定固肾定喘丸中丹皮酚的含量.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC测定固肾定喘丸中丹皮酚的含量 周月玲 　　(广州白云区敬修堂敬药业股份有限公司 广东广州 510130) 　　【摘要】目的通过测定固肾定喘丸中丹皮酚的含量对其质量进行控制；方法采用高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography,HPL-C)，选用XDBC（250mmtimes;4.6mm，10mu;m，），甲醇-水（45：55）为流动相；柱温：25℃，流速为1.0ml?min-1；测定波长为274nm；进样量：10mu;L。结果丹皮酚在4.312-107.800mu;g范围内线性关系良好（A=203.29X+2.74，r=1.0000），平均回收率为99.06％，RSD=0.28％；结论该方法简便、灵敏、准确，可用于固肾定喘丸的质量控制。 　　【关键词】HPLC 固肾定喘丸 丹皮酚 　　【中图分类号】R96 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2014）16-0320-02 　　1.仪器与试药 　　Agilent1200全自动高效液相色谱仪，Agilent1200系列四元泵，AgilentG1314BVWD1200系列可变波长紫外检测器，Agilent1200化学工作站；KQ-电子分析天平（瑞士METTLERTOLEDO，型号：XS105）。KQ-600DE型数控超声波清洗器甲醇为分析纯；水为去离子水。对照品：丹皮酚对照品 固肾定喘丸由广州白云山敬修堂药业股份有限公司提供 　　2.方法与结果 　　2.1色谱条件 　　色谱柱为Hypersil-C18柱（250mmtimes;4.6mm，10mu;m，特），甲醇-水（45:55）为流动相，流速为1.0ml?min-1，检测波长274nm，柱温为室温。理论塔板数应不低于5000，此条件下待测组分与其它组分达到有效分离。 　　2.2溶液的制备 　　2.2.1对照品溶液的制备 　　精密称取丹皮酚对照品1mg，置于50ml的容量瓶中，加入甲醇至刻度，作为贮备液，即得。 　　2.2.2供试品溶液的制备 　　精密量取本品0.5g，置于50mL烧瓶里，精确加入甲醇25，用天平称出重量，利用超声波处理30min，放冷，再确定重量，根据溶液的减少量补足甲醇，再摇匀，过滤，取续滤液，即可配制出供试品溶液。 　　2.3方法学考察 　　2.3.1线性范围考察 　　精密吸取丹皮酚2、4、6、8、10、12mu;l的对照品溶液进行色谱测定，按“2.1”项所述色谱条件分别测定峰面积。按照横坐标为进样量X(mu;l)，纵坐标为峰面积（mAUS）的参数绘制标准曲线，得出回归方程。丹皮酚的回归方程是：A=203.29X+2.74，相关系数r=1.0000。丹皮酚在4.312-107.800mu;g范围内有良好线性关系。结果见表1，图3。 　　表1 丹皮酚的线性范围 　　图三 　　2.3.2精密度试验 　　精密吸取（20.58mu;g.ml-1）10mu;l的丹皮酚对照品溶液,在“2.1”项色谱条件下重复进样6次，测得连翘苷峰面积的平均值为2006.1，RSD为0.69%。见表2： 　　表2 精密度试验 　　2.3.4重复性试验 　　取同一批号（批号：L01003）固肾定喘丸按供试品溶液制备方法制备5份供试样品，每份测定2次，测得丹皮酚的平均含量为103.60mu;g.ml-1，RSD为1.1%。 　　2.3.5回收率试验 　　精密吸取已知含量的固肾定喘丸样品（批号：L01003）1ml，分别精密加入10ml丹皮酚对照品贮备液，按供试品溶液制备方法制成加样供试品溶液，吸取加样供试品溶液10mu;l注入液相色谱仪。按上述方法测定加样供试品溶液中丹皮酚的含量平行操作6份，按“2.1”项色谱条件测定含量，分别计算回收率。2.4样品测定 　　精密量取丹皮酚对照溶液10mu;l，供试品溶液10mu;l分别注入液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件，计算丹皮酚含量。 　　3.讨论 　　3.1有效成分 　　丹皮酚是中药牡丹皮的有效成分，而且含量较高，故以其为指标，测定其在制剂中的含量，以此来控制固肾定喘丸的质量。 　　3.2波长的选择 　　最佳检测波长的选择经查阅文献,丹皮酚对照品溶液在274nm波长处有最大吸收,中国药典2010年版一部牡丹皮含量测定选用274nm作为检测波长[1],因此实验选择274pnm作为检测波长。 　　3.3流动相的选择 　　通过查阅文献[2-10]，发现曾有人采用：乙腈-1％冰乙酸系统、乙腈-水系统、甲醇-乙酸-水系统，通过参照文献和实验结果的基础上，发现发现采用甲醇-水（45:55）时，丹皮